G1发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞系
在细胞周期调控与胚胎发育研究领域，G1发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞系凭借其du特的荧光标记特性与稳定的干细胞潜能，成为可视化追踪细胞周期进程、解析胚胎干细胞命运决定机制的重要工具，为干细胞生物学与发育生物学研究提供了创新的实验模型。
细胞特性与标记原理：该细胞系源自 C57BL/6 小鼠囊胚内细胞团，通过基因编辑技术将绿色荧光蛋白（GFP）基因精准整合至 G1 期特异性表达的细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）启动子下游，使细胞进入 G1 期时自发表达 GFP，在荧光显微镜下呈现明亮的绿色荧光，而处于 S、G2、M 期时荧光信号显著减弱，为实时监测细胞周期转换提供了直观标记。细胞形态呈典型胚胎干细胞特征，圆形或椭圆形，核质比高达 1:1.2，细胞核大而清晰，核仁明显，细胞紧密聚集形成克隆状生长，边缘光滑，克隆内部细胞连接紧密。核心参数稳定：qun体倍增时间约 18-22 小时，连续传代 40 次后仍保持正常核型（40 条染色体，XY 性别决定）；流式细胞术检测显示，G1 期荧光阳性细胞比例约 45%，与细胞周期自然分布规律一致；干细胞标志物 Oct4、Sox2、Nanog 免疫荧光染色均呈强阳性，表明其未分化状态稳定；细胞纯度达 96%，无微生物污染，保障了实验的可靠性与重复性。
科研应用价值：在细胞周期调控研究中，该细胞系可通过荧光强度变化动态追踪 G1 期向 S 期转换的时间节点，结合 EdU 掺入实验，能精准量化不同处理因素（如细胞因子、小分子抑制剂）对 G1 期滞留时间的影响，为解析细胞周期检查点调控机制提供可视化数据。在胚胎干细胞分化研究中，当细胞向神经外胚层分化时，G1 期荧光持续时间延长约 30%，而向中胚层分化时荧光信号提前减弱，揭示了细胞周期时相变化与谱系定向分化的关联，为探索干细胞命运决定的时序调控规律提供了关键证据。此外，该细胞系可用于构建嵌合体小鼠模型，通过荧光追踪观察供体细胞在早期胚胎发育中的增殖与分化轨迹，其在囊胚注射后的嵌合率达 82%，为研究胚胎干细胞在体内的动态分布提供了理想工具。
培养与保存规范：需在滋养层细胞（如经丝裂mei素 C 处理的小鼠胚胎成纤维细胞）上培养，或使用含 LIF（白血病抑制因子）的无血清培养基维持未分化状态，培养基推荐采用 DMEM/F12 基础培养基，添加 15% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸、0.1mM β- 巯基乙醇及 1% 抗生素混合液。培养环境为 37℃、5% CO₂、95% 湿度的恒温培养箱，每日观察荧光强度变化以监测细胞周期状态。传代时采用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 消化，待克隆边缘细胞松动后终止消化，传代比例 1:3-1:5，每 24-36 小时传代一次，避免克隆过度生长导致分化。冻存液配方为基础培养基 + 20% FBS+10% DMSO，经程序降温后存入液氮，复苏后细胞存活率达 90% 以上，荧光标记特性在复苏后 3 代内即可wan全恢复。运输方式建议采用干冰冷冻运输，收到后立即复苏培养，且该细胞系仅限科研使用，禁止用于人体相关实验。
该细胞系以其精准的 G1 期荧光标记、稳定的干细胞特性及便捷的可视化操作，在细胞周期动态研究与胚胎发育机制探索中具有不可替代的价值，为揭示干细胞增殖与分化的调控网络提供了强大的实验支撑。
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