标准品的稀释原则: 2 瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml ,盖好后静置 10 分钟以上,然后反复颠倒 / 搓动以助溶解,其浓度为 300 pg/ml ,做系列倍比稀释后,分别稀释 300 pg/ml , 150 pg/ml , 75 pg/ml , 37.5 pg/ml , 18.5 pg/ml , 9 pg/ml , 4.5 pg/ml ,样品稀释液直接作为标准浓度 0 pg/ml ,临用前 15 分钟内配制。 如配制 150 pg/ml 标准品:取 0.5ml (不要少于 0.5ml ) 300 pg/ml 的上述标准品加入含 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则: 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100 μ l ),实际配制时应多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 生物素标记抗体加 990 μ l 生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则: 临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100 μ l ),实际配制时应多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 辣根过氧化物酶标记亲和素加 990 μ l 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
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●利用干扰实验即可鉴别ELISA试剂盒是否检测目的抗原,方法如下:● (1) 将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody: antigen= 1:2的混合孵育液 (2) 37℃孵育15分钟后,代替原试剂盒中的检测抗体 (3) 后续操作按照试剂盒说明书进行,加检测抗体、酶复合物和底物 (4)实验完毕后,检测其标准曲线,如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配,试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原,该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。 (5) 如果标准曲线无线性,则说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰,影响了其实际试剂盒抗体的检测作用,则该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。
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编辑:小檀20181008
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