标准品的稀释原则: 2 瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml ,盖好后静置 10 分钟以上,然后反复颠倒 / 搓动以助溶解,其浓度为 300 pg/ml ,做系列倍比稀释后,分别稀释 300 pg/ml , 150 pg/ml , 75 pg/ml , 37.5 pg/ml , 18.5 pg/ml , 9 pg/ml , 4.5 pg/ml ,样品稀释液直接作为标准浓度 0 pg/ml ,临用前 15 分钟内配制。 如配制 150 pg/ml 标准品:取 0.5ml (不要少于 0.5ml ) 300 pg/ml 的上述标准品加入含 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则: 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100 μ l ),实际配制时应多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 生物素标记抗体加 990 μ l 生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则: 临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100 μ l ),实际配制时应多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 辣根过氧化物酶标记亲和素加 990 μ l 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
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细胞凋亡发生时,内源性核酸内切酶将分解核小体区间的双链DNA,但核小体本身由于由组蛋白紧密结合而免受切割,单克隆抗体可以与核小体形成夹心结构,可通过检测核小体判断细胞是否经历凋亡事件。 ●原理:●细胞凋亡的发生,是由于钙-镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA,产生180bp~200bp或其倍数的核小体片段。而核小体由于与组蛋白H2A、H2B、H3和H4形成紧密复合物而不被核酸内切酶切割。采用双抗体夹心酶免疫法,应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体,与核小体片段形成夹心结构,可特异性检测细胞溶解物中的核小体片段。
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编辑:小檀20181008
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