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TECHNICAL ARTICLES详细介绍
来源与构建:该细胞系以 BHK-21(幼仓鼠肾细胞)为亲本,通过慢病毒载体介导将犬源或人源 SLAM 基因导入细胞基因组,经 G418 抗性筛选及单克隆纯化获得稳定株,“slam/v" 标识其表达的 SLAM 受体及病毒敏感性特征。构建过程中采用 EF1α 启动子驱动表达,结合 kozak 序列优化翻译起始效率,使 SLAM 受体膜定位率达 90% 以上,显著提升病毒结合效率。
形态与增殖:体外培养呈典型成纤维样形态,贴壁生长,细胞呈长梭形,排列疏松,边界清晰,核质比适中,形态与亲本 BHK-21 细胞一致。在 37℃、5% CO₂条件下,增殖速度快,传代周期约 18-24 小时,可适应含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基,传代 50 次以上仍能维持 SLAM 高表达(表达量为亲本细胞的 30-40 倍),病毒敏感性无明显衰减,优于瞬时转染系统。
表达特征:SLAM 为 I 型跨膜糖蛋白,膜表达量达(2.5-3.0)×10⁵分子 / 细胞(流式细胞术检测),对副黏病毒科病毒(如犬瘟热病毒、麻疹病毒)的亲和力高(解离常数 Kd≈3×10⁻⁹ M)。其胞外域可特异性结合病毒血凝素蛋白,介导病毒包膜与细胞膜融合,显著提升病毒入侵效率(感染滴度比亲本 BHK-21 细胞高 10-100 倍),且支持病毒完整复制周期(从吸附到释放约 48-72 小时)。
SLAM 介导的病毒感染机制研究
病毒疫苗开发与生产
抗病du药物筛选与评估
优势:SLAM 受体表达稳定,长期传代后病毒敏感性波动<10%,实验重复性优于原代细胞;增殖速度快于 CHO 等细胞系,病毒培养周期缩短 30%-40%,适合高通量实验;兼容贴壁与悬浮培养,可实现从实验室研究到工业化生产的无缝衔接;对多种 SLAM 依赖型病毒敏感,适用范围覆盖犬瘟热、麻疹、牛瘟等重要病毒,应用价值广泛。
局限性:SLAM 表达可能受培养条件影响(如血清浓度),需严格控制培养参数;作为仓鼠细胞,与人源 SLAM 存在物种差异,部分人病毒研究需结合人源细胞验证;对非 SLAM 依赖型病毒敏感性低,应用范围存在局限。
培养条件:常规使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基,添加 400μg/mL G418 维持抗性筛选,37℃、5% CO₂培养箱中生长良好。传代时控制融合度在 60%-70%,采用温和方法分离细胞,避免过度处理影响受体表达。悬浮培养可采用无血清培养基逐步驯化,最终细胞密度可达 5×10⁶个 /mL,病毒产量无明显下降。
质控与安全:定期通过流式细胞术检测 SLAM 膜表达量,病毒感染实验验证敏感性;STR 鉴定确保细胞纯度,支原体检测需为阴性。冻存使用含 10% DMSO 的wan全培养基,液氮保存可维持活性 5 年以上,复苏后传代 2 次待状态稳定后再用于实验,涉及高致病性病毒时需在相应生物安全实验室操作。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
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