技术文章
TECHNICAL ARTICLES详细介绍
来源与建立背景
形态与生长特征
功能特性
SV40 大 T 抗原表达:持续高表达 SV40 病毒大 T 抗原(阳性率 100%),该蛋白可与 p53、Rb 等抑癌蛋白结合并使其失活,同时能与含 SV40 复制起点的质粒结合,启动质粒在细胞内的自主复制,使外源基因拷贝数提升 10-100 倍,表达量可达细胞总蛋白的 10%。
转染效率:脂质体介导的瞬时转染效率达 80% 以上,电穿孔转染效率超 90%,显著高于同类灵长类细胞系;对多种表达载体兼容,尤其适合含 SV40 启动子的质粒,转染后 48-72 小时即可检测到高丰度外源蛋白。
病毒支持能力:可支持多种 DNA 病毒(如腺病毒、疱疹病毒)的复制,对逆转录病毒包装效率高,可生产滴度达 10⁸ TU/mL 的重组病毒,为基因递送系统研究提供关键工具。
基因功能与蛋白质相互作用研究
瞬时表达平台:作为外源基因瞬时表达的 “黄金标准",COS-7 细胞被广泛用于验证基因编码产物的功能。例如,通过转染荧光标记的膜蛋白基因,可在 48 小时内观察到蛋白在细胞膜上的定位,共聚焦显微镜成像分辨率高,背景荧光低,结果重复性达 95%。
蛋白质相互作用筛选:利用其高效表达特性,通过免疫共沉淀(Co-IP)技术研究蛋白质相互作用,可在 1 周内完成从转染到结果验证的流程。研究发现,某肿瘤相关蛋白与转录因子的结合强度在 COS-7 细胞中与体内实验一致性达 85%,显著高于大肠杆菌表达系统。
病毒学研究与疫苗开发
病毒复制机制解析:因表达 SV40 大 T 抗原,可用于研究依赖该蛋白的病毒复制过程,如多瘤病毒的 DNA 复制周期;同时可作为病毒滴度测定的标准细胞系,腺病毒 TCID₅₀检测的变异系数<5%,结果稳定可靠。
重组疫苗生产:在基因工程疫苗研发中,COS-7 细胞可快速生产病毒样颗粒(VLPs),如人乳头瘤病毒(HPV)VLPs 的产量达 50μg/10⁶细胞,纯度超 90%,免疫原性与昆虫细胞表达系统相当,但生产周期缩短 30%。
重组蛋白生产与药物筛选
功能蛋白制备:适用于生产需翻译后修饰的重组蛋白,如糖基化酶、膜受体等。某重组ren干扰素在 COS-7 细胞中的表达量达 200ng/mL,比原核表达系统的活性高 10 倍,且糖基化修饰与天然蛋白一致。
药物靶点验证:通过转染疾病相关突变基因,构建药物筛选模型。在阿尔茨海默病研究中,转染突变型 APP 基因的 COS-7 细胞可分泌 Aβ42 肽,筛选出的抑制剂可使 Aβ42 水平下降 60%,动物实验显示其能减少脑内斑块形成。
基础培养方案
培养基:DMEM 高糖培养基添加 10% 胎牛血清、100U/mL 青mei素、100μg/mL 链mei素,pH 维持在 7.2-7.4,无需添加生长因子即可维持良好生长状态;血清浓度可降至 5% 以减少背景干扰(如用于荧光蛋白观察)。
传代流程:当细胞融合度达 80% 时,用 0.25% yi酶 - EDTA 消化 3 分钟,终止消化后按 1:8 比例接种,离心速度 1200rpm,24 小时贴壁率超 95%,避免过度融合(>90% 会导致细胞形态改变)。
冻存保护:采用含 10% DMSO 的wan全培养基,细胞密度 2×10⁶个 /mL,程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮,复苏时 37℃水浴 1 分钟,直接接种无需离心,存活率可达 90%。
转染与功能实验操作
脂质体转染步骤:细胞以 5×10⁵个 / 孔接种 6 孔板,培养 24 小时至融合度 60%-70%,将 2μg 质粒与 5μL 脂质体混合,室温孵育 20 分钟后加入细胞,6 小时后换液,48 小时检测表达效率,转染效率稳定在 80% 左右。
病毒滴度测定:将重组病毒 10 倍梯度稀释后感染 COS-7 细胞(3×10⁴个 / 孔,96 孔板),37℃培养 72 小时,通过荧光计数或细胞病变法计算滴度,每稀释度设 8 复孔以保证结果可靠性。
优势:
转染效率卓yue:瞬时转染效率居灵长类细胞系首wei,且对多种载体兼容,是基因功能研究的shou选模型。
培养简便:适应多种培养基,传代操作简单,成本低于其他永生化灵长类细胞系,适合大规模实验。
功能稳定性:连续传代后仍保持高效表达能力,实验结果重复性高(变异系数<5%),被全球实验室广泛验证。
局限性:
永生化特征:因 SV40 转化导致细胞增殖异常,可能丢失部分正常肾细胞功能,不适合研究细胞周期调控或抑癌基因功能。
基因组不稳定性:染色体数目异常,可能影响长期实验的一致性,建议短期(<20 代)内使用。
翻译后修饰差异:虽然优于原核系统,但与人类细胞的糖基化模式存在细微差异,重组蛋白用于临床前研究时需谨慎验证。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
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