TPO-CHO-I中国仓鼠卵巢细胞系稳定表达人血小板生成素，上皮样，贴壁生长，可用于 TPO 功能研究、相关受体结合实验及促血小板药物筛选。

构建背景：TPO 是调控巨核细胞增殖分化与血小板生成的关键细胞因子，该细胞系通过载体介导（如含 CMV 启动子的表达质粒）将人 TPO 基因导入 CHO 细胞，经嘌呤霉素抗性筛选获得稳定分泌株，“I" 代表筛选得到的高表达克隆，确保 TPO 产量的均一性。

形态与增殖：体外培养时呈典型上皮样形态，贴壁生长，细胞呈多边形，排列紧密，形态与亲本 CHO 细胞一致。在 37℃、5% CO₂条件下，传代周期约 2-3 天，可适应含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基，兼容悬浮培养与无血清体系，高密度培养时（细胞密度达 1×10⁶个 /mL）仍能保持稳定增殖，为大规模生产 TPO 奠定基础。

表达特征：TPO 主要分泌至细胞外培养基中，表达量可达 5-10μg/（10⁶细胞・24h），且长期传代（＞30 代）后分泌量波动＜15%。分泌的 TPO 为糖基化蛋白，分子量约 70kDa（含糖链），与天然人 TPO 的结构与活性高度一致，通过 Western blot 可检测到特异性条带，且能被 TPO 抗体中和。

优势：TPO 分泌稳定，避免重组蛋白表达的批次差异；产物活性高，糖基化修饰与天然 TPO 一致，生物活性（如刺激巨核细胞增殖）是原核表达 TPO 的 3-5 倍；培养适应性强，可通过悬浮培养放大生产，降低大规模制备成本；分泌型表达便于产物纯化，无需裂解细胞，简化下游处理流程。

局限性：长期培养需维持抗生素筛选压力（如 2μg/mL 嘌呤霉素），否则易丢失表达质粒；TPO 分泌可能受细胞密度影响，需优化培养条件以保持产量稳定；作为异源表达系统，其糖基化模式与人类细胞存在细微差异，虽不影响主要活性，但用于临床级药物生产时需进一步验证。

培养条件：基础培养基为含 10% 胎牛血清、2μg/mL 嘌呤霉素的 DMEM/F12，添加青mei素 - 链mei素防污染。传代时用 0.25% yi酶消化，贴壁培养融合度控制在 60%-80%，避免过度密集导致 TPO 分泌量下降。悬浮培养可采用含 5% 血清的 CDM4CHO 培养基，通过生物反应器实现规模化生产，TPO 产量可达 20-50mg/L。

TPO 活性检测：推荐使用巨核细胞增殖实验验证活性，如将培养上清与 UT-7/TPO 细胞共孵育 48 小时，通过 CCK-8 法检测细胞活力，活性单位定义为刺激 50% 最大增殖的上清稀释倍数，通常比活性＞1×10⁵U/mg。

冻存与复苏：冻存液含 10% DMSO、2μg/mL 嘌呤霉素，液氮保存可维持活性 3 年以上；复苏时 37℃快速解冻，离心后用含筛选压力的培养基重悬，传代 2 次后检测 TPO 分泌量，确保活性稳定。