EPO-CHO-T中国仓鼠卵巢细胞系（亚系克隆），稳定分泌人促红细胞生成素，上皮样，贴壁生长，适用于 EPO 功能研究、药物筛选及重组蛋白制备。

构建背景：EPO 是调控红细胞生成的关键细胞因子，该亚系克隆通过载体介导（如含 EF-1α 启动子的表达质粒）将人 EPO 基因导入 CHO 细胞，经 G418 抗性筛选及单克隆纯化获得高表达株，“T" 代表筛选得到的稳定分泌亚系，确保 EPO 产量与活性的均一性。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长，细胞呈多边形，排列紧密，形态与亲本 CHO 细胞一致。在 37℃、5% CO₂条件下，传代周期约 2-3 天，可适应含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基，兼容悬浮培养与无血清体系，高密度培养（细胞密度达 1.5×10⁶个 /mL）时仍能维持稳定增殖，为大规模生产 EPO 奠定基础。

表达特征：EPO 主要分泌至细胞外培养基，表达量可达 8-12μg/（10⁶细胞・24h），长期传代（＞40 代）后分泌量波动＜10%。分泌的 EPO 为糖基化蛋白，分子量约 34kDa（含 30%-40% 糖链），与天然人 EPO 的糖型分布高度一致，通过 Western blot 可检测到特异性条带，且能被 EPO 抗体中和，体外刺激红系祖细胞增殖的活性是原核表达产物的 5-8 倍。

优势：EPO 分泌稳定，避免重组蛋白表达的批次差异；糖基化修饰与天然 EPO 一致，体内半衰期（约 8-12 小时）接近天然蛋白，生物活性显著优于原核或酵母表达系统；培养适应性强，可通过悬浮培养放大至生物反应器生产，降低大规模制备成本；分泌型表达便于产物纯化，无需裂解细胞，简化下游处理流程。

局限性：长期培养需维持 G418 筛选压力（通常 500μg/mL），否则易丢失表达质粒；EPO 分泌受细胞密度与代谢状态影响，需优化培养条件（如控制葡萄糖浓度）以保持产量稳定；作为异源表达系统，糖链末端唾液酸含量略低于人源细胞，虽不影响主要活性，但用于临床级药物生产时需进一步优化。

培养条件：基础培养基为含 10% 胎牛血清、500μg/mL G418 的 DMEM/F12，添加青mei素 - 链mei素防污染。传代时用 0.25% yi酶消化，贴壁培养融合度控制在 60%-80%，避免过度密集导致 EPO 分泌量下降。悬浮培养可采用无血清培养基（如 CHO-S-SFM II），通过生物反应器实现规模化生产，EPO 产量可达 30-50mg/L。

EPO 活性检测：推荐使用 TF-1 细胞增殖实验验证活性，将培养上清与 TF-1 细胞共孵育 48 小时，通过 CCK-8 法检测细胞活力，活性单位定义为刺激 50% 最大增殖的上清稀释倍数，通常比活性＞1.5×10⁵U/mg。

冻存与复苏：冻存液含 10% DMSO、500μg/mL G418，液氮保存可维持活性 5 年以上；复苏时 37℃快速解冻，离心后用含筛选压力的培养基重悬，传代 2 次后检测 EPO 分泌量，确保活性稳定。