CHO-rFVIII-11中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，可悬浮培养，稳定表达重组凝xue因子 VIII，活性高，适用于血友病研究、药物开发及凝血机制探索。

来源与构建：该细胞系以 CHO-K1 或 CHO-S 细胞为亲本，通过慢病毒载体介导将人源 FVIII 基因（含 B 结构域缺失突变，提高表达效率）导入细胞基因组，经潮霉素抗性筛选及单克隆纯化获得稳定株。“rFVIII-11" 代表其表达的重组蛋白及克隆编号，确保蛋白表达的均一性与功能性。构建过程中采用 CMV/EF1α 双启动子驱动表达，结合绝缘子元件减少基因沉默，显著提升长期表达稳定性。

形态与增殖：体外培养呈上皮样形态，兼具贴壁与悬浮生长能力，悬浮状态下呈单个或小聚集体（直径＜60μm），细胞圆润饱满，活力达 90% 以上。在 37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 28-36 小时，可适应无血清悬浮培养基（如 EX-CELL® CHO CD），传代 50 次以上仍能维持稳定生长速率，高密度培养（细胞密度达 6×10⁶个 /mL）时 rFVIII 表达量无明显下降。

表达特征：rFVIII 主要分泌至培养基中，表达量达 5-8 IU/10⁶细胞 / 24 小时（通过凝血法测定），长期传代（＞40 代）后活性波动＜10%。该蛋白保留天然 FVIII 的 A1-A2-B-A3-C1-C2 结构域（部分株系含 B 结构域缺失），能与 vWF 因子结合，在凝血反应中可激活 FX，凝血活性达天然因子的 85% 以上，翻译后修饰（如糖基化）接近人源天然蛋白。

优势：rFVIII 表达稳定且活性高，长期传代后功能无明显衰减，优于瞬时表达系统；兼容悬浮培养与生物反应器放大，适合工业化生产，降低药物成本；rFVIII 翻译后修饰接近人源，免疫原性低，临床应用安全性高；遗传背景清晰，可通过基因编辑（如敲除蛋白酶基因）进一步提升蛋白产量与稳定性。

局限性：rFVIII 表达量仍受限于 CHO 细胞的翻译后修饰能力，比活性略低于血浆来源 FVIII；培养过程需严格控制蛋白酶污染，避免 rFVIII 降解；无血清培养时需添加特定生长因子（如胰岛素），增加培养基成本。

培养条件：常规使用无血清悬浮培养基，添加 400μg/mL 潮霉素维持抗性筛选，补加 L - 谷an酰胺与维生素 K（促进 γ- 羧化）。传代时采用离心法（1000×g，5 分钟）收集细胞，避免过度消化影响活性；悬浮培养转速控制在 120-150 rpm，减少剪切力对细胞的损伤。

质控与冻存：定期通过凝血法检测 rFVIII 活性，Western blot 验证蛋白完整性；采用 PCR 法检测支原体污染，STR 鉴定确保细胞纯度。冻存时使用含 10% DMSO 的无血清冻存液，梯度降温后保存于液氮，复苏后传代 2 次待活性稳定后再用于实验。