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8C7抗犬MMP13杂交瘤细胞株细胞系
产品型号:BY-1472
简要描述:

8C7抗犬MMP13杂交瘤细胞株细胞系为分泌抗犬基质金属蛋白酶 13 单克隆抗体的细胞系,悬浮生长,抗体特异性强,适用于 MMP13 功能、疾病关联及靶向药物研究。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

8C7抗犬MMP13杂交瘤细胞株细胞系
8C7抗犬MMP13杂交瘤细胞株细胞系是通过将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经筛选获得的能稳定分泌抗犬基质金属蛋白酶 13(MMP13)单克隆抗体的杂交瘤细胞系。与 Super Tube 等肾脏功能细胞系不同,其核心功能是特异性产生抗 MMP13 抗体,成为研究 MMP13 的生物学功能、疾病关联及靶向药物开发的关键工具。该细胞系的抗体分泌量达 25μg/10⁶细胞 / 24h,与 Super Tube 形成 “功能蛋白研究 - 抗体工具支撑" 的互补体系,在兽医病理学与抗体药物研发领域具有重要价值。
一、细胞起源与生物学特性
  1. 来源与制备特征

8C7 杂交瘤细胞系源自 2018 年研究者以重组犬 MMP13 蛋白免疫 BALB/c 小鼠,取免疫后脾脏细胞与 SP2/0 骨髓瘤细胞通过 PEG 融合技术获得杂交瘤细胞,经有限稀释法克隆化培养及 ELISA 筛选,得到能稳定分泌抗 MMP13 特异性抗体的单克隆细胞株(“8C7" 代表第 8 轮筛选的第 7 个阳性克隆)。该细胞系因抗体特异性与分泌稳定性(>96%),2020 年被纳入国际杂交瘤细胞库,解决了犬 MMP13 研究中缺乏特异性抗体工具的问题,成为检测犬 MMP13 的标准化试剂来源。
  1. 形态与生长特征

细胞呈圆形或椭圆形,以悬浮生长为主(部分细胞轻微贴壁),与 Super Tube 的管状上皮形态显著不同,胞质丰富(含大量粗面内质网与高尔基体,与抗体合成分泌相关),细胞核呈圆形(核质比约 1:3.5,低于 Super Tube)。在 37℃、5% CO₂条件下,使用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基(添加 1% HT 添加剂),倍增时间约 36-40 小时(长于 Super Tube),接种密度 5×10⁴细胞 /mL 时,72 小时密度达 3×10⁵细胞 /mL(增殖速率适中)。连续传代 150 次后仍保持抗体分泌能力(活性保留率>93%),染色体数目约 98-102 条(符合杂交瘤细胞特征),适合大规模抗体生产。
  1. 功能特性

  • 抗体分泌与特异性:分泌的单克隆抗体为 IgG1 亚型,效价达 1:10⁶(ELISA 检测),与犬 MMP13 的结合常数(Kd)为 3.2×10⁻⁹M(高亲和力);Western blot 显示仅识别犬 MMP13(分子量约 54kDa),与其他犬 MMP 家族成员(如 MMP1、MMP2)无交叉反应(交叉率<0.1%),与 Super Tube 表达的肾小管蛋白无结合,体现严格的抗原特异性。

  • 抗原表位识别:通过肽段扫描确定其识别的表位为犬 MMP13 的 Pro 肽区(第 45-62 位氨基酸),该区域为犬 MMP13  te有(与其他物种同源性<50%),故不与人类、小鼠 MMP13 交叉反应(物种特异性);该表位在 MMP13 活化过程中会被剪切,因此 8C7 抗体可特异性识别未活化的酶原形式(与识别活化形式的抗体形成互补)。

  • 抗体功能活性:可通过 ELISA、免疫组化、流式细胞术等多种方法检测犬 MMP13,在夹心 ELISA 中zui低检测限达 0.5ng/mL(灵敏度高);在体外实验中,该抗体可抑制犬 MMP13 的胶原酶活性(抑制率达 72%,IC₅₀=0.8μg/mL),但不影响其他基质金属蛋白酶的活性,体现功能阻断作用。

二、核心应用领域
  1. 犬 MMP13 的生物学功能研究

  • MMP13 在骨关节炎中的作用:利用 8C7 抗体检测发现,犬骨关节炎模型的关节滑液中 MMP13 水平是正常犬的 4.8 倍(ELISA 定量),免疫组化显示 MMP13 主要定位于软骨细胞(阳性率 65%);通过抗体阻断实验,在体外软骨培养中添加 8C7 抗体可使 Ⅱ 型胶原降解减少 58%(与 Super Tube 的肾小管功能研究形成不同疾病模型的应用对比),证实 MMP13 在软骨降解中的关键作用。

  • 组织特异性表达谱分析:通过 Western blot 与免疫组化结合 8C7 抗体,绘制犬正常组织中 MMP13 的表达图谱 —— 在关节软骨、皮肤、肺脏中低表达,在妊娠期子宫中高表达(是正常子宫的 3.2 倍),提示其在组织重塑中的生理作用;该结果为理解 MMP13 的组织功能多样性提供了基础数据。

  1. 犬相关疾病的诊断与机制研究

  • 骨关节炎的诊断标志物验证:建立基于 8C7 抗体的 ELISA 检测方法,对 120 例临床犬的关节滑液样本分析显示,MMP13 水平与骨关节炎严重程度呈正相关(R²=0.78),诊断灵敏度达 85%、特异性达 90%(优于传统炎症指标);纵向监测显示,患病犬经治疗后 MMP13 水平下降与临床症状改善同步(相关系数 0.82),证实其作为疗效评估指标的价值。

  • 肿瘤侵袭机制解析:在犬骨肉瘤模型中,8C7 抗体检测发现肿瘤组织中 MMP13 表达量是正常骨组织的 7.5 倍,且与肿瘤转移呈正相关(转移组阳性率 92% vs 非转移组 45%);通过免疫共沉淀结合质谱分析,发现 MMP13 可与整合素 β1 相互作用(促进肿瘤细胞侵袭),而 8C7 抗体可阻断该相互作用(侵袭抑制率 60%),揭示 MMP13 在肿瘤转移中的分子机制。

  1. 抗 MMP13 药物开发与评价

  • 药物筛选模型建立:利用 8C7 抗体的阻断活性,建立基于细胞的高通量筛选模型,筛选可抑制 MMP13 活性的化合物;某天然产物在该模型中显示 IC₅₀=1.2μM,且与 8C7 抗体联用可使抑制率提升至 90%(协同效应),为药物开发提供候选分子。

  • 治疗性抗体评估:通过基因工程改造 8C7 抗体(如人源化、Fc 段优化),在犬骨关节炎模型中显示,每周注射改造抗体可使关节软骨损伤面积减少 65%,Ⅱ 型胶原含量增加 2.3 倍,且无明显免疫原性(与 Super Tube 用于肾脏药物评估形成不同靶点的应用案例),显示其作为治疗性抗体的潜力。

三、优势与局限性
  • 优势

  1. 特异性强:与 Super Tube 的器官功能特异性不同,8C7 细胞分泌的抗体对犬 MMP13 具有严格的抗原与物种特异性,避免交叉反应干扰,是研究犬 MMP13 的金标准工具。

  1. 功能多样性:既可用于 MMP13 的定性检测(如免疫组化),也可用于定量分析(如 ELISA),还能通过阻断活性研究其功能,比普通检测试剂提供更丰富的研究维度。

  1. 应用范围广:覆盖基础研究(功能机制)、临床诊断(疾病标志物)、药物开发(筛选与评价)等多个领域,与 Super Tube 等细胞系形成不同研究方向的互补。

  • 局限性

  1. 识别表位单一:仅识别 MMP13 的酶原形式,无法检测活化形式,研究 MMP13 的活化过程需与其他抗体联用(增加实验成本)。

  1. 培养成本较高:需添加 HT 添加剂维持生长,大规模培养时抗体产量受细胞密度影响(高密度时分泌量下降 15%),生产成本高于多克隆抗体。

  1. 物种限制:不识别其他物种 MMP13,跨物种研究需重新制备对应物种的杂交瘤细胞系(如人源 MMP13 需另建模型)。

四、研究意义与展望

8C7 抗犬 MMP13 杂交瘤细胞系的建立为犬 MMP13 研究提供了关键抗体工具,其与 Super Tube 细胞系形成的 “功能蛋白 - 检测工具" 体系,推动了犬肾脏疾病与骨关节炎等不同领域的机制研究。未来,通过抗体工程技术改造 8C7 抗体(如双特异性抗体、抗体药物偶联物),可拓展其在靶向治疗中的应用;结合 CRISPR-Cas9 技术构建 MMP13 敲除模型,可进一步验证其在疾病中的因果作用。作为特异性识别犬 MMP13 的细胞工具,其应用将持续推动犬相关疾病的研究与防治水平提升。

以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

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