CHO-TIM-4-Fc中国仓鼠卵巢细胞株细胞系，上皮样，可贴壁或悬浮生长，稳定分泌 TIM-4-Fc 融合蛋白，对凋亡细胞及病毒亲和力高，适用于免疫机制、病毒研究及相关药物开发。

来源与构建：该细胞系以 CHO-K1 细胞为亲本，通过脂质体转染法导入含 TIM-4 胞外域（IgV 结构域）与 IgG1 Fc 段的融合基因表达载体，经潮霉素抗性筛选及单克隆纯化获得稳定株，“TIM-4-Fc" 明确标识其表达的融合蛋白组成。构建过程中采用 EF1α 启动子驱动表达，结合分泌信号肽优化，使融合蛋白分泌效率提升 25%，90% 以上以可溶性形式存在于培养上清中，便于纯化与功能研究。

形态与增殖：体外培养呈上皮样形态，可适应贴壁与悬浮两种生长模式，悬浮培养时形成直径 20-40μm 的松散聚集体，细胞轮廓清晰，活力长期维持在 90% 以上。在 37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 32-38 小时，适应无血清化学限定培养基（如 CD CHO Medium），高密度培养时细胞密度可达 8×10⁶个 /mL，传代 70 次以上仍保持稳定生长速率，融合蛋白表达量无明显衰减，冻存复苏后存活率超 85%。

表达特征：该细胞系分泌的 TIM-4-Fc 融合蛋白兼具 TIM-4 的生物学活性与 Fc 段的纯化优势：分子量约 60kDa（SDS-PAGE 检测），TIM-4 部分可特异性识别凋亡细胞表面的磷脂酰丝an酸（PS），结合常数（KD）达 8.5×10⁻⁹ M（流式细胞术检测），与天然 TIM-4 受体活性相当；同时对 EB 病毒、巨细胞病毒等包膜病毒具有亲和力（KD≈2.3×10⁻⁸ M）。Fc 段可通过 Protein A 亲和层析高效纯化（纯度超 97%），4℃保存 30 天活性保留率超 88%。

优势：TIM-4-Fc 融合蛋白表达稳定，长期传代后活性波动＜10%，实验重复性强；兼具对凋亡细胞与病毒的结合活性，可同时服务于免疫与病毒研究，应用范围广泛；悬浮高密度培养时蛋白产量达 2.5-3.5g/L（流加培养），纯化便捷，降低原料生产成本；对凋亡细胞的识别特异性高（与正常细胞结合率＜5%），实验干扰小。

局限性：融合蛋白的 TIM-4 部分为仓鼠源，与人源 TIM-4 存在少量序列差异，部分人类细胞实验需结合人源化改造株验证；对不依赖 PS 暴露的病毒无明显结合活性，应用范围存在局限；悬浮培养时聚集体过大（＞50μm）会降低蛋白分泌效率，需控制搅拌速率（90-110 rpm）。

培养条件：悬浮培养推荐使用无血清化学限定培养基，添加 200μg/mL 潮霉素维持抗性筛选，37℃、5% CO₂环境中搅拌培养。传代时维持细胞密度在 1.5×10⁵-6×10⁶个 /mL，避免营养匮乏影响蛋白表达。流加培养阶段，补加葡萄糖（维持浓度 3-5g/L）与氨基酸混合液，可延长蛋白分泌期至 12 天以上。

质控与安全：定期通过 Western blot 检测融合蛋白表达，流式细胞术验证对凋亡细胞的结合活性；STR 鉴定排除交叉污染，支原体检测需为阴性。冻存使用含 10% DMSO 的无血清冻存液，液氮保存可维持活性 5 年以上，复苏后传代 2 次待状态稳定后用于实验，涉及病毒操作需符合生物安全二级标准。