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详细介绍
来源与构建:该细胞系以 BHK-21 仓鼠肾细胞为亲本,通过脂质体转染导入含 BQS24 启动子、目的基因多克隆位点及新mei素抗性基因的表达载体,经 G418 筛选及单克隆纯化获得稳定株。“BQS24" 标识其核心调控元件 ——BQS24 启动子(一种受病毒感染诱导的顺式作用元件),可在病毒复制时启动下游基因表达,实现 “病毒感应 - 基因激活" 的联动效应。
形态与增殖:体外培养呈典型成纤维样形态,贴壁生长,细胞呈长梭形,排列疏松,核质比适中,边界清晰。在 37℃、5% CO₂条件下,增殖周期约 22-28 小时,适应含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基,传代 60 次以上仍保持稳定生长速率,BQS24 元件活性无明显衰减,冻存复苏后存活率超 85%。
功能特征:该细胞系的核心优势在于 BQS24 启动子的病毒响应性:在未感染状态下,下游基因基础表达量极低(仅为 CMV 启动子的 1%-3%);感染水疱性口炎病毒(VSV)、脊髓灰质炎病毒等后,启动子被快速激活,4-6 小时内报告基因表达量提升 50-100 倍(荧光素酶检测),且激活强度与病毒滴度呈正相关(线性范围 10²-10⁶ PFU/mL),可作为病毒感染的 “生物传感器"。
病毒复制机制研究
抗病du药物筛选
重组蛋白可控表达
贴壁培养操作:
复苏:从液氮取出冻存管,37℃水浴 1-2 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(DMEM+10% 胎牛血清 + 500μg/mL G418)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T25 培养瓶,37℃、5% CO₂培养箱静置培养。
换液:接种 24 小时后首ci换液,去除未贴壁细胞,此后每 48 小时换液一次,维持细胞密度在 30%-70%(避免过度融合影响活性)。
传代:当细胞融合度达 80% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加入 1mL 0.25% yi酶 - EDTA,37℃孵育 2 分钟,镜检细胞脱落后加入 5mL 培养基终止消化,1000rpm 离心 5 分钟,按 1:3 比例传代至新培养瓶。
病毒诱导实验处理:
冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,用冻存液(70% wan全培养基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重悬至 4×10⁶个 /mL,分装至冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜,次日转移至液氮保存,保存期可达 5 年以上。
优势:BQS24 元件响应迅速,病毒感染后 4 小时内即可检测到信号;基因调控动态范围宽,适合量化分析;贴壁性能优异,可用于长时程共聚焦成像;对多种 DNA 和 RNA 病毒均有响应,适用范围广。
局限性:高滴度病毒感染(MOI>5)会导致细胞病变,影响后续实验;部分病毒(如腺病毒)可能不激活 BQS24 启动子,需提前验证适配性;长期传代可能导致 G418 抗性丢失,需定期筛选阳性克隆。
BHK/BQS24 细胞系的建立为病毒学研究提供了兼具敏感性与可控性的工具,其 “病毒感应 - 基因激活" 特性推动了对病毒复制与宿主响应关系的理解。在基础研究中,其助力阐明病毒调控宿主基因的分子机制,为发现抗病毒靶点提供线索;在应用领域,其加速了抗病du药物的筛选与开发进程,尤其对新发突发病毒病的应急研究具有重要价值,同时为重组蛋白的可控表达提供了新型诱导系统,拓展了基因工程细胞的应用场景。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
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