CHO-hKLs-his-12中国仓鼠卵巢细胞株细胞系，上皮样，可贴壁或悬浮生长，稳定表达带 his 标签的人源 KLs 蛋白，纯度高，适用于蛋白功能研究、抗体开发及相关药物筛选。

来源与构建：该细胞系以 CHO-S 为亲本，通过电穿孔转染将含人源 KLs 全长 cDNA 与 C 端 12×his 标签的表达载体导入细胞，经 Zeocin 抗性筛选及单克隆纯化获得稳定株。KLs 基因由 EF1α 启动子驱动表达，结合分泌信号肽优化序列，确保融合蛋白高效分泌至培养基（分泌效率达 85% 以上），名称中 “hKLs-his-12" 直接标识其表达的核心蛋白及标签特征。

形态与增殖：体外培养呈上皮样形态，贴壁生长时呈多角形，排列紧密；悬浮培养可形成直径 20-50μm 的松散聚集体，细胞圆润透亮，活力长期维持在 92% 以上。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 28-34 小时，适应无血清化学限定培养基（如 Gibco CD CHO），传代 70 次以上仍保持稳定生长速率，hKLs-his-12 表达量无明显衰减，冻存复苏后存活率超 90%。

表达特征：该细胞系的核心优势在于重组蛋白的高表达与可纯化性：悬浮流加培养条件下，hKLs-his-12 蛋白表达量达 3-5g/L，经 Ni²⁺亲和层析纯化后纯度超 98%（SDS-PAGE 检测）；Western blot 显示其分子量约 68kDa，与理论值一致，且保留 KLs 的天然活性（可抑制成纤维细胞衰老标志物 p16 表达，抑制率达 40%-50%）。

贴壁培养操作：

悬浮培养与蛋白纯化：

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，用冻存液（90% 无血清培养基 + 10% DMSO）重悬至 6×10⁶个 /mL，分装至冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜，次日转移至液氮保存，保存期可达 5 年以上。

优势：hKLs-his-12 蛋白表达稳定，批次间活性差异＜7%；12×his 标签可高效结合 Ni²⁺柱，纯化步骤简单（纯度一步可达 95%）；悬浮培养适应性强，可放大至反应器规模生产；蛋白活性接近天然 KLs，功能实验可靠性高。

局限性：高浓度重组蛋白（＞10μg/mL）可能抑制细胞增殖，需定期更换培养基；his 标签可能干扰部分蛋白互作实验，需结合标签切除验证；培养成本高于普通 CHO 细胞（因无血清培养基价格较高）。