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详细介绍
来源与驯化:该细胞系源自 CHO-K1 细胞,通过多轮非选择性传代与适应性培养获得:初期以广谱表达能力为指标,筛选能稳定表达多种外源蛋白(如细胞因子、抗体片段)的克隆;后续经含血清与无血清培养基双向适应,增强培养模式的灵活性,最终获得 CHO-E0 株系。“E0" 代表其作为 “基础型(E)零改造(0)" 细胞的特性,标识其未引入外源基因改造的通用属性。
形态与增殖:体外培养呈典型上皮样形态,贴壁生长时呈多角形,排列规则;悬浮培养形成直径 20-60μm 的松散聚集体,细胞圆润饱满,活力长期维持在 93% 以上。37℃、5% CO₂条件下,增殖周期约 26-32 小时,兼容含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基与多种无血清化学限定培养基,传代 150 次以上仍保持稳定生长速率,外源蛋白表达量波动<10%,冻存复苏后存活率超 90%。
表达特征:该细胞系的核心优势在于广谱适配性:转染不同类型表达载体(如质粒、病毒载体)后,重组蛋白表达量可达 2-5g/L(流加培养),尤其对难表达蛋白(如膜蛋白、多亚基复合体)的适配性突出。以 G 蛋白偶联受体(GPCR)表达为例,其膜定位率达 85% 以上,比普通 CHO-K1 提升 20%,且受体配体结合活性保留率超 90%,为功能研究提供高质量样本。
基础研究模型构建
重组蛋白生产
药物开发工艺优化
贴壁培养操作:
复苏:从液氮取出冻存管,37℃水浴 1-2 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(DMEM/F12+10% 胎牛血清)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T75 培养瓶,37℃、5% CO₂培养箱静置培养。
换液:接种 24 小时后更换培养基,去除未贴壁细胞,此后每 48 小时换液一次,维持培养基 pH 7.2-7.4。
传代:当细胞融合度达 80%-90% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加入 2mL 0.25% yi酶 - EDTA,37℃孵育 2-3 分钟,镜检细胞脱落后加入 8mL 培养基终止消化,按 1:5 比例传代至新培养瓶。
悬浮培养操作:
冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,用冻存液(70% wan全培养基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重悬至 5×10⁶个 /mL,分装至冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜,次日转移至液氮保存,保存期可达 5 年以上。
优势:遗传稳定性优异,长期传代无明显表型漂移;对不同表达载体兼容性强,无需针对特定蛋白优化细胞系;培养条件宽松,可在含血清与无血清培养基间灵活切换;成本可控,适合大规模基础研究与工艺开发。
局限性:重组蛋白表达量低于专项改造株(如 CHO-D3b);对部分复杂糖基化蛋白的修饰能力有限;悬浮培养时聚集体大小不均一(10-100μm),需优化搅拌参数。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
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