247C-B4Z2-01-C-005重组中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，贴壁或悬浮生长，含特定重组元件，蛋白表达稳定，适用于生物药研发、重组蛋白生产及相关功能验证实验。

来源与构建：该细胞系以 CHO-K1 为亲本，采用同源重组技术将含 B4Z2 启动子、目的基因多克隆位点及 hygromycin 抗性基因的表达框定点整合至 CHO 基因组安全位点。名称中 “247C-B4Z2-01-C-005" 为克隆筛选标识，其中 “B4Z2" 代表核心调控元件 —— 一种受四环素类似物诱导的启动子，可通过添加 doxycycline 实现蛋白表达的时空调控。构建过程中采用绝缘子序列优化，使外源基因表达波动幅度控制在 5% 以内。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长时呈多角形，排列紧密；悬浮培养形成直径 20-40μm 的松散聚集体，细胞轮廓清晰，活力长期维持在 92% 以上。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 30-36 小时，适应无血清化学限定培养基（如 HyClone SFM4CHO），传代 100 次以上仍保持稳定生长速率，诱导后目标蛋白表达量衰减＜7%，冻存复苏后存活率超 88%。

功能特征：该细胞系的核心优势在于 B4Z2 启动子的诱导调控特性：未诱导状态下，目标蛋白基础表达量＜0.1μg/mL；添加 1μg/mL doxycycline 后，24 小时内表达量快速升至 2-4g/L（流加培养），诱导倍数达 50-100 倍（ELISA 检测），且诱导效率与诱导剂浓度呈线性相关（有效范围 0.01-5μg/mL），可精准控制蛋白合成时机，减少毒性蛋白对细胞的损伤。

贴壁培养操作：

悬浮诱导培养：

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，用冻存液（80% 无血清培养基 + 10% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 5×10⁶个 /mL，分装至冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜，次日转移至液氮保存，保存期可达 5 年以上。

优势：B4Z2 启动子诱导响应精准，基础表达极低（＜0.1% 诱导表达量）；定点整合确保表达稳定性，传代 60 次无明显衰减；兼容贴壁与悬浮培养，可无缝放大至生物反应器；产物糖基化修饰均一，批间差异＜5%，符合生物药质量要求。

局限性：诱导剂 doxycycline 可能残留于产物中，需优化纯化工艺去除；高诱导强度下（＞5μg/mL）可能抑制细胞增殖，需控制诱导浓度；构建周期长（约 3 个月），初始筛选成本较高。