247A-B9Z4-02-C-T9重组中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，贴壁或悬浮生长，含 B9Z4 调控元件，可诱导表达目标蛋白，稳定性高，适用于生物药研发、蛋白生产及工艺优化。

来源与构建：该细胞系以 CHO-S 为亲本，采用 CRISPR/Cas9 介导的定点整合技术，将含 B9Z4 启动子、目的基因克隆位点及嘌呤霉素抗性基因的表达盒插入 CHO 基因组的 Rosa26 安全位点。名称中 “247A-B9Z4-02-C-T9" 为克隆筛选标识，其中 “B9Z4" 代表核心调控元件 —— 一种受蜕皮激素类似物诱导的启动子，可通过添加 ponasterone A 实现蛋白表达的时序调控。构建过程中引入基质附着区（MAR）序列，使外源基因表达波动控制在 4% 以内，显著优于随机整合株系。

形态与增殖：体外培养呈上皮样形态，贴壁生长时呈多角形，排列紧密；悬浮培养形成直径 15-35μm 的均一聚集体，细胞圆润透亮，活力长期维持在 93% 以上。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 28-34 小时，适应多种无血清化学限定培养基（如 Gibco CD OptiCHO），传代 120 次以上生长速率无明显下降，诱导后目标蛋白表达量衰减＜6%，冻存复苏后存活率超 90%。

功能特征：该细胞系的核心优势在于 B9Z4 启动子的诱导特异性：未诱导时目标蛋白基础表达量＜0.05μg/mL（仅为诱导状态的 0.5%）；添加 1μM ponasterone A 后，36 小时内表达量可达 3-6g/L（流加培养），诱导倍数达 100-200 倍（ELISA 检测），且诱导效率在 0.1-10μM 范围内呈严格剂量依赖性，便于精准调控蛋白合成速率，尤其适合毒性蛋白的生产。

贴壁培养操作：

悬浮诱导培养：

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，用冻存液（85% 无血清培养基 + 10% 胎牛血清 + 5% DMSO）重悬至 6×10⁶个 /mL，分装至冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜，次日转移至液氮保存，保存期可达 6 年以上。

优势：B9Z4 启动子诱导背景更低（＜0.5% 诱导表达量），适合高毒性蛋白生产；ponasterone A 诱导剂无细胞毒性，可维持长期高表达；定点整合结合 MAR 序列，传代 80 次表达稳定；产物糖基化均一性优异（批间差异＜4%），符合 FDA/EMA 质量标准。

局限性：ponasterone A 成本高于四环素类诱导剂（约为 2 倍）；诱导后 24-36 小时才达表达峰值，快速响应实验需提前规划；对培养基中固醇类物质敏感，需严格控制成分一致性。