247B-B9Z4-01-C-T9重组中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，贴壁或悬浮生长，含 B9Z4 调控元件，可诱导表达目标蛋白，稳定性佳，适用于生物药研发、蛋白生产及工艺优化。

来源与构建：该细胞系以 CHO-DG44 为亲本（区别于 247A 的 CHO-S 背景），采用 TALEN 介导的定点整合技术，将含优化版 B9Z4 启动子、目的基因克隆位点及 Zeocin 抗性基因的表达盒插入 CHO 基因组的 HPRT 位点。名称中 “247B-B9Z4-01-C-T9" 标识其为 247 系列的 B 亚型克隆，核心调控元件 B9Z4 启动子经序列修饰，增强了对 ponasterone A 的响应灵敏度，同时删除潜在沉默子序列，使外源基因表达稳定性进一步提升。

形态与增殖：体外培养呈上皮样形态，贴壁生长时细胞铺展面积略大于 247A 株系，排列更疏松；悬浮培养形成直径 10-30μm 的细密聚集体，均一度优于 247A（变异系数＜15%）。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 26-32 小时，较 247A 缩短 2-4 小时，适应无血清培养基范围更广（含 Ex-Cell CHO、PowerCHO 等），传代 120 次以上生长速率衰减＜5%，诱导后蛋白表达量波动＜5%，冻存复苏存活率超 92%。

功能特征：核心优势在于 B9Z4 启动子的高灵敏度与快速响应：未诱导时目标蛋白基础表达量＜0.03μg/mL（仅为诱导状态的 0.3%）；添加 0.5μM ponasterone A 后，24 小时内表达量达 4-7g/L（流加培养），诱导倍数提升至 200-300 倍，较 247A 提高约 50%。对诱导剂浓度响应更精准（有效范围 0.05-5μM），便于微调蛋白表达量，尤其适合需严格控制剂量的功能实验。

贴壁培养操作：

悬浮诱导培养：

冻存流程：对数期细胞离心后，用冻存液（90% 无血清培养基 + 5% 胎牛血清 + 5% DMSO）重悬至 7×10⁶个 /mL，冻存复苏后活力恢复速度较 247A 快 6-8 小时，适合紧急实验启动。

优势：较 247A 增殖更快，适合高密度培养；诱导响应更迅速，达峰时间缩短 12 小时；灌流培养适应性更强，代谢副产物积累少；Zeocin 抗性筛选效率更高，阳性克隆比例提升 20%。

局限性：对剪切力略敏感，反应器搅拌速率需控制在 100-130rpm（247A 可耐受 140rpm）；高浓度诱导剂（＞5μM）下表达量反而下降 5%-8%，需严格控制剂量；培养基成本较 247A 高 5%-10%。