CHO-DHFR+中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，贴壁或悬浮生长，含功能性 DHFR 基因，可高效合成ye酸，适用于基因扩增研究、重组蛋白生产及药物筛选。

来源与遗传背景：该细胞系源自 CHO-K1 细胞的天然筛选克隆，区别于 DHFR 缺陷型（DHFR⁻）细胞，其保留功能性 DHFR 基因，可自主合成四氢ye酸（相关代谢的关键中间产物），无需外源性胸苷补充。名称中 “DHFR+" 直接标识其核心代谢特征 ——DHFR 基因功能正常，这一特性使其在无选择压力条件下仍能稳定增殖，避免了 DHFR⁻细胞对培养基成分的严苛依赖。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长时呈多角形，排列紧密；悬浮培养形成直径 30-80μm 的聚集体，细胞圆润饱满，活力长期维持在 91% 以上。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 28-34 小时，兼容含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基与多种无血清培养基，传代 100 次以上生长速率衰减＜8%，相关合成能力无明显下降，冻存复苏后存活率超 88%。

功能特征：核心优势在于 DHFR 介导的基因扩增潜力：当携带 DHFR 基因与目标基因的表达载体转染后，在特定抑制剂逐步加压筛选下，可通过基因共扩增机制使外源基因拷贝数增加 10-100 倍，目标蛋白表达量随之提升 5-20 倍（ELISA 检测）。与 DHFR⁻细胞相比，其无需预先敲除内源性 DHFR，基因编辑步骤简化 40%，且扩增过程中细胞存活率提高 25%-30%。

基础培养操作：

基因扩增与筛选：

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，用冻存液（70% wan全培养基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 5×10⁶个 /mL，程序降温盒 - 80℃过夜，次日转移至液氮保存，保存期可达 5 年以上，复苏后需在含特定抑制剂的培养基中恢复 2-3 代以稳定表达。

优势：无需敲除内源性 DHFR，基因操作简便；特定抑制剂加压下细胞存活率高，阳性克隆筛选效率提升 30%；相关代谢通路完整，可用于代谢相关研究；扩增后的表达稳定性优于 DHFR⁻细胞（传代 50 次衰减＜15%）。

局限性：基础表达量低于工程化 CHO 株系；高浓度特定抑制剂（＞1μM）下细胞形态易发生畸变；扩增过程耗时较长（需 6-8 周），快速筛选需求受限。