CHO-E2中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，贴壁或悬浮生长，稳定表达 E2 蛋白，抗原活性强，适用于病毒疫苗研发、免疫原性分析及抗病du药物筛选，应用广泛。

来源与构建：该细胞系以 CHO-K1 为亲本，通过电穿孔转染将含 E2 全长基因的表达载体导入细胞基因组，经 G418 抗性筛选及单克隆纯化获得稳定株。E2 基因由 CMV 启动子驱动表达，编码序列源自病毒包膜蛋白（如丙型肝炎病毒、冠状病毒），未添加任何标签序列，名称中 “E2" 直接标识其表达的核心功能蛋白 —— 未经修饰的天然病毒抗原。构建过程中优化了信号肽序列，确保 E2 蛋白高效分泌至培养基（分泌效率达 85% 以上），且折叠构象与天然病毒颗粒上的 E2 蛋白一致性达 90% 以上（圆二色谱检测）。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长时呈多角形，排列规则；悬浮培养形成直径 25-60μm 的聚集体，细胞轮廓清晰，活力长期维持在 90% 以上。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 30-36 小时，兼容含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基与多种无血清化学限定培养基，传代 80 次以上仍保持稳定生长速率，E2 蛋白表达量波动＜10%，冻存复苏后存活率超 87%。

功能特征：该细胞系的核心优势在于 E2 蛋白的天然性：与融合蛋白相比，其表达的 E2 无 Fc 段或 His 标签干扰，完整保留病毒抗原的原始表位（ELISA 检测与天然病毒 E2 的交叉反应率＞98%）。流式细胞术显示，仅 5% 以下的 E2 蛋白滞留于细胞表面，95% 以上分泌至培养基，且蛋白三聚体比例达 30%-40%（接近天然病毒包膜上的聚合状态），为研究 E2 的多聚体功能提供了理想材料。

贴壁培养操作：

悬浮培养与蛋白纯化：

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，用冻存液（80% 无血清培养基 + 10% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 5×10⁶个 /mL，分装至冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜，次日转移至液氮保存，保存期可达 5 年以上，复苏后需在含 G418 的培养基中培养 2-3 代以稳定表达。

优势：E2 蛋白保留天然构象与表位，免疫原性分析更真实；无标签干扰，适合表位 mapping 与抗体特异性验证；分泌效率高，悬浮培养表达量达 4-7g/L；蛋白聚合状态接近天然病毒，功能研究可靠性强。

局限性：无标签导致纯化步骤较融合蛋白复杂（需特异性抗体亲和柱）；部分 E2 蛋白可能形成错误折叠（约 5%-8%），需通过分子筛去除；因无 Fc 段稳定作用，体外半衰期较 E2-Fc 短（4℃保存 7 天活性保留 80%）。