CHO/Dnmt3b-7中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，贴壁或悬浮生长，Dnmt3b 表达下调，DNA 甲基化水平改变，适用于表观遗传研究、基因表达调控分析及相关药物筛选。

来源与构建：该细胞系以 CHO-K1 为亲本，通过设计靶向 Dnmt3b 基因第 7 外显子的 sgRNA，经慢病毒介导的 CRISPR/Cas9 系统实现基因编辑，筛选获得 Dnmt3b 表达下调 70%-80% 的单克隆株（“Dnmt3b-7" 标识靶向位点与克隆编号）。构建过程中未引入外源抗性基因，通过 T7EI 酶切与测序验证，确保编辑效率＞90%，且无脱靶效应（全基因组测序显示脱靶率＜0.01%）。

形态与增殖：体外培养呈上皮样形态，贴壁生长时细胞铺展面积略大于野生型 CHO，排列较疏松；悬浮培养形成直径 25-50μm 的聚集体，均一度良好（变异系数＜18%）。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 32-38 小时，较野生型延长 4-6 小时，适应含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基与无血清培养基，传代 80 次以上 Dnmt3b 表达量稳定（下调幅度波动＜5%），冻存复苏后存活率超 85%。

功能特征：核心优势在于 DNA 甲基化谱的特异性改变：全基因组甲基化芯片显示，其基因组 CG 岛甲基化水平平均降低 28%，其中启动子区低甲基化基因占比达 15%（显著高于野生型的 3%），尤以细胞周期调控、代谢相关基因启动子低甲基化最为显著（如 CDKN2A 启动子甲基化水平下降 42%）。同时，Dnmt3b 下游靶基因（如 HOX 家族基因）表达量上调 2-5 倍（qPCR 验证），wan美模拟 Dnmt3b 功能缺失的表观遗传表型。

贴壁培养操作：

甲基化检测样本制备：

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，用冻存液（70% wan全培养基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 6×10⁶个 /mL，分装至冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜，次日转移至液氮保存，保存期可达 5 年以上，复苏后需传代 2 次再进行甲基化相关实验（确保表观遗传状态稳定）。

优势：Dnmt3b 表达稳定下调，甲基化表型重复性高（批间差异＜6%）；无外源抗性基因干扰，适合长期表观遗传研究；全基因组甲基化谱特征明确，可作为甲基化异常模型的标准对照；对甲基化药物响应灵敏，筛选效率较野生型提升 40%。

局限性：部分基因甲基化改变可能非 Dnmt3b 直接调控（需结合 ChIP 验证）；长期传代（＞80 次）可能出现甲基化补偿性恢复（约 5%-8%）；增殖速率较慢，大规模实验需提前规划培养周期。