CHO-K1中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，贴壁生长，遗传背景稳定，无天然代谢缺陷，适用于重组蛋白生产、生物药研发及基因编辑工具验证。

来源与驯化：该细胞系源自 1957 年分离的中国仓鼠卵巢组织，经克隆筛选获得第 1 株稳定传代的亚系（“K1" 代表克隆编号）。原代细胞通过yi酶消化法分离，经 60 代连续传代后形成永生化株系，未引入外源基因，全基因组测序显示其染色体数目为 2n=20-22（存在天然异倍性），与原代卵巢细胞遗传相似度＞96%，核型稳定性在传代 100 次内畸变率＜3%。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长时呈多角形，胞质丰富且边界清晰，排列紧密呈铺路石状；悬浮培养可形成松散聚集体（直径 20-50μm），适应无血清悬浮驯化。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 18-22 小时，较其他 CHO 亚系更短，适应含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基，传代 200 次以上生长速率衰减＜15%，冻存复苏后存活率超 90%。

功能特征：核心优势在于全能性蛋白表达与修饰系统：具备完整的糖基化、磷酸化等翻译后修饰 machinery，重组蛋白产物与天然蛋白结构一致性达 95% 以上；无 DHFR（二氢ye酸还原酶）等代谢缺陷，可直接在基础培养基中生长，外源基因整合效率较 CHO-S 高 20%。同时，其对基因编辑工具（如 CRISPR/Cas9）响应灵敏，突变效率可达 35%-50%，便于构建工程细胞株。

贴壁培养操作：

悬浮驯化流程：

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，冻存液（70% 培养基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 1×10⁷个 /mL，分装冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮，保存期超 7 年，复苏后传代 1 次即可用于实验。

优势：遗传背景清晰，无天然代谢缺陷；蛋白表达量高（5-8g/L）且翻译后修饰接近人源；适应贴壁与悬浮培养，可规模化放大；基因编辑效率高，便于工程改造；传代稳定性优异，200 代内特性无显著改变。

局限性：部分复杂糖蛋白（如含多天线高甘露糖型）表达效率低；悬浮培养时易形成大聚集体（＞100μm），影响传质效率；长期传代可能积累随机突变（＞200 代），需定期纯化克隆。