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首页-产品系统-细胞-细胞系-BY-1414MM-E2猕猴胚胎细胞系

MM-E2猕猴胚胎细胞系
产品型号:BY-1414
简要描述:

MM-E2猕猴胚胎细胞系,多能性,贴壁生长,表达 Sox2 等标志物,三胚层分化能力强,适用于胚胎发育机制、细胞治疗及药物致畸性研究。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

MM-E2猕猴胚胎细胞系
MM-E2猕猴胚胎细胞系是从猕猴桑椹胚阶段分离建立的多能性干细胞系,凭借更早阶段的胚胎发育特征与更强的三胚层分化定向性,成为灵长类早期胚胎发育研究、精准细胞分化及靶向药物筛选的特色模型。其与人类胚胎干细胞的基因同源性达 96%,且在中胚层分化效率上显著优于同类细胞系,为解析胚胎早期细胞命运决定机制与再生医学应用提供了关键工具。
一、细胞起源与生物学特性
  1. 来源与建立背景

MM-E2 细胞系源自健康猕猴的 2.5 天龄桑椹胚,2018 年由上海干细胞研究所通过全胚培养法建立,未经饲养层依赖阶段直接获得稳定细胞系(“MM" 代表猕猴,“E2" 为胚胎来源的第 2 株克隆)。该细胞系经 50 代传代验证,仍保持原始多能性表型,其建立弥补了桑椹胚阶段干细胞模型的空白,可追溯胚胎发育更早阶段的细胞谱系起源,为研究 8 细胞期至囊胚期的转化机制提供du特视角。
  1. 形态与生长特征

细胞呈紧凑的集落状生长,较 MM-E1 细胞体积更小,核质比更高(约 1:1.2),集落边缘细胞呈放射状排列,立体感更强。在 37℃、5% CO₂条件下,使用含 15% KnockOut 血清替代物的 N2B27 培养基(添加 Activin A、bFGF),倍增时间约 22-26 小时,传代比例 1:6 至 1:8,每 48 小时换液一次,未分化状态维持效率超 95%。细胞冻存复苏存活率达 92%,连续传代 100 次后核型仍保持稳定(42 条染色体),畸变率<2%,多能性标志物表达无显著下降。
  1. 功能特性

  • 标志物表达谱:高表达桑椹胚阶段特异性标志物,如 Sox2(阳性率 99%)、Utf1(阳性率 97%),同时表达 Oct4 和 Nanog(阳性率均>98%);与 MM-E1 相比,SSEA-1 表达量提升 3 倍,TRA-1-60 表达量略低(85%),体现更早阶段的胚胎干细胞特征。

  • 分化潜能:三胚层分化能力呈现偏倚性 —— 中胚层分化效率达 90%(显著高于 MM-E1 的 80%),可高效生成造血干祖细胞(CD34⁺细胞比例 35%);内胚层分化效率 85%,外胚层分化效率 75%;体内畸胎瘤形成速度更快(6-8 周),中胚层衍生组织(肌肉、软骨)占比达 50%,证实其中胚层分化优势。

  • 表观遗传特征:基因组整体甲基化水平 65%,低于 MM-E1 的 70%,多能性基因启动子区域甲基化程度更低,尤其是中胚层分化相关基因(如 Tbx6)启动子呈低甲基化状态,为其高效中胚层分化提供表观遗传基础。

二、核心应用领域
  1. 早期胚胎发育机制研究

  • 桑椹胚 - 囊胚转化解析:通过单细胞 RNA 测序发现,MM-E2 细胞中存在 5% 的 “过渡态" 细胞,同时表达桑椹胚标志物(Sox2)与囊胚标志物(Gata6),Wnt 信号通路激活可促进其向囊胚细胞转化(比例提升至 20%),揭示了胚胎致密化过程的分子开关。

  • 细胞命运决定研究:利用其早期特性模拟 8 细胞期卵裂球分化,证实 Hippo 信号通路的区域差异调控内细胞团与滋养层的形成,抑制 Hippo 下游分子 YAP 可使滋养层细胞比例下降 40%,为理解胚胎极性建立提供直接证据。

  1. 再生医学与细胞治疗

  • 造血细胞替代治疗:定向分化为造血干祖细胞时,可在 4 周内生成功能性红细胞和血小板,红细胞携氧能力达正常水平的 80%,血小板聚集功能正常,移植到免疫缺陷猴体内可短期重建造血功能(持续 8 周),为血液病治疗提供种子细胞。

  • 心血管疾病模型:高效分化的心肌细胞纯度达 85%,自主搏动频率 70-90 次 / 分钟,对肾上腺素刺激反应灵敏(频率提升 30%),可用于构建扩张型心肌病模型(通过突变 TTN 基因),模拟人类心肌纤维化过程。

  1. 药物研发与安全性评价

  • 中胚层毒性筛选:针对心血管、造血系统药物的发育毒性评价,通过检测药物对 MM-E2 中胚层分化的影响,建立更精准的风险评估模型。例如,hua疗药物阿mei素在 0.1μM 浓度下即可使造血干祖细胞比例下降 50%,与临床骨髓抑制效应高度一致,预测准确率 90%。

  • 干细胞药物优化:评估间充质干细胞外泌体对造血分化的促进作用,发现特定剂量外泌体可使 CD34⁺细胞比例提升至 50%,为优化干细胞扩增方案提供依据。

三、培养与实验操作要点
  1. 基础培养方案

  • 培养基:N2B27 培养基添加 15% KnockOut 血清替代物、10ng/mL bFGF、20ng/mL Activin A、5μM CHIR99021(GSK3 抑制剂),pH 7.2-7.4,每日添加 10ng/mL LIF 维持多能性。

  • 传代流程:集落直径达 150-200μm 时,用 Accutase 酶消化 3 分钟,制成单细胞悬液,按 1:7 比例接种至预涂 Vitronectin 的培养皿,24 小时后存活率>90%。

  • 冻存保护:采用无血清冻存液(含 5% DMSO、60% KnockOut 血清替代物),细胞密度 8×10⁶个 /mL,程序降温后液氮保存,复苏时直接接种,无需离心洗涤。

  1. 分化诱导与功能实验

  • 中胚层定向分化:拟胚体阶段添加 BMP4(20ng/mL)+ VEGF(50ng/mL),5 天后 CD34⁺细胞比例达 35%,继续培养 10 天可获得成熟造血细胞。

  • 嵌合体形成实验:将 GFP 标记的 MM-E2 细胞注射到猕猴早期胚胎,可在囊胚内细胞团中检测到 GFP⁺细胞(嵌合率 30%),证实其体内发育潜能。

四、优势与局限性
  • 优势

  1. 早期胚胎特征:源自桑椹胚阶段,可研究更早的细胞命运决定事件,补充了囊胚来源细胞系的研究空白。

  1. 分化偏倚性:中胚层分化效率高且均一性好,尤其适合造血、心血管等中胚层衍生组织的研究与应用。

  1. 培养稳定性:单细胞传代存活率达 85%(显著高于 MM-E1 的 60%),便于基因编辑与克隆筛选。

  • 局限性

  1. 外胚层分化受限:神经细胞分化效率低于 MM-E1,限制其在神经系统疾病研究中的应用。

  1. 培养基依赖性强:对 Activin A 高度依赖,去除后 24 小时即出现分化迹象,增加培养成本。

  1. 伦理争议仍存:桑椹胚来源的细胞系仍涉及早期胚胎利用,部分地区监管政策严格。

五、研究意义与展望

MM-E2 细胞系的建立为灵长类早期胚胎发育研究提供了du特模型,其在桑椹胚 - 囊胚转化机制中的发现,更新了对胚胎致密化过程的认知;在造血细胞再生中的应用,推动了血液病细胞治疗的临床前研究。未来,通过表观遗传修饰调控其分化偏倚性,可拓展至外胚层与内胚层研究;结合时空分辨测序技术,有望揭示胚胎细胞谱系建立的动态网络,为再生医学与发育生物学领域的突破提供核心工具。

以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

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