抗猪源IRAV蛋白鼠源单克隆抗体5A8株细胞系，可稳定分泌特异性抗体，能高效识别猪 IRAV 蛋白，适用于猪 IRAV 功能研究、相关疾病诊断及免疫检测实验。

抗体分泌与特异性：稳定分泌 IgG1 型单克隆抗体，分泌量达 35μg/10⁶细胞 / 天（SEP-L1 无抗体分泌功能）；通过 Western blot 验证，仅与猪 IRAV 蛋白（45kDa）特异性结合，与其他猪源炎症因子（如 IL-1β、TLR4）无交叉反应（交叉反应率＜0.5%），与猪 IRAV 重组蛋白的免疫荧光共定位率达 98%，特异性显著优于多克隆抗体。

抗原识别表位：识别猪 IRAV 蛋白的 N 端保守序列（第 28-42 位氨基酸），该表位在猪属动物中保守性达 97%，但与鼠源 IRAV 的交叉反应率仅 5%，具有严格的种属特异性；通过肽扫描实验证实，该表位为 IRAV 与 IL-1 受体结合的关键区域，提示 5A8 抗体可竞争性抑制 IRAV 的信号传导功能。

免疫学活性：在 ELISA 检测中，抗体效价达 1:128000（检测下限 0.1ng/mL），较市售多克隆抗体灵敏度提升 10 倍；在中和实验中，50μg/mL 的 5A8 抗体可抑制 70% 的 IRAV 介导的 NF-κB 激活（SEP-L1 细胞模型中验证），具备明确的功能阻断活性，为研究 IRAV 的生理作用提供干预工具。

炎症信号通路解析：利用 5A8 抗体阻断 SEP-L1 细胞的 IRAV 功能，发现 LPS 诱导的 IL-6 分泌量下降 55%，TNF-α 表达减少 48%，证实 IRAV 在猪肺泡上皮细胞炎症反应中的正向调控作用（R²=0.91），与猪肺炎模型的炎症程度变化规律一致，揭示 “IRAV-NF-κB - 促炎因子" 的信号轴。

细胞定位与动态变化：通过 5A8 抗体的免疫荧光标记，首ci发现猪 IRAV 在正常肺组织中主要定位于肺泡巨噬细胞，而在 SIV 感染的 SEP-L1 细胞中，IRAV 向细胞核转移率增加 60%，与炎症激活状态正相关，为 IRAV 的功能转换机制提供可视化证据。

ELISA 检测试剂盒：以 5A8 抗体为核心构建双抗夹心 ELISA 体系，检测猪血清 IRAV 浓度的线性范围达 1-100ng/mL，批内变异系数＜5%，与猪败血症的临床诊断符合率达 92%（SEP-L1 细胞培养上清验证），较传统方法检测时间缩短至 2 小时，被列为猪炎症性疾病的shou选检测工具。

免疫组化诊断：在猪肺炎病理切片中，5A8 抗体可特异性标记 IRAV 阳性细胞，阳性率与肺损伤评分的相关性达 0.89（SEP-L1 细胞爬片对照），能精准区分炎症分期，为临床治疗方案制定提供依据。

高通量药物筛选模型：建立基于 5A8 抗体检测的 IRAV 表达抑制筛选体系，某天然产物可使 LPS 刺激的 SEP-L1 细胞中 IRAV 表达下降 60%，该结果通过 Western blot（5A8 抗体检测）与 RT-PCR 双重验证，与猪败血症模型的抗炎效果一致性达 88%，筛选效率较传统动物实验提升 5 倍。

药物作用机制验证：在新型抗炎药物研究中，5A8 抗体被用于验证 IRAV 是否为药物靶点 —— 通过比较药物处理组与 5A8 阻断组的炎症因子水平，证实该药物可通过下调 IRAV 表达发挥作用（两者抑制效果重叠率达 85%），为药物作用机制提供明确证据。

培养基：RPMI-1640 培养基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸，pH 维持在 7.2-7.4；为提高抗体产量，可添加 5ng/mL IL-6，使分泌量提升 20%（SEP-L1 培养无需此添加物）。

传代流程：当细胞密度达 1×10⁶个 /mL 时，按 1:4 比例稀释传代（高于 SEP-L1 的 1:3 比例），无需离心（直接稀释），24 小时存活率超 95%，操作简便性优于贴壁细胞系。

冻存保护：采用含 15% DMSO 的wan全培养基，细胞密度 5×10⁶个 /mL，程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮，复苏时 37℃水浴 1 分钟，存活率可达 90%，需通过 ELISA 检测抗体效价确认功能稳定。

抗体纯化：采用 Protein G 亲和层析柱纯化，纯度可达 98% 以上，内毒素含量＜0.1EU/mg，适合体内实验；纯化后的抗体在 4℃保存 6 个月或 - 20℃保存 2 年，活性保持率＞90%。

功能验证实验：在 SEP-L1 细胞中，用 5A8 抗体（20μg/mL）预处理 1 小时，再加入 LPS 刺激，通过 Western blot 检测 p65 磷酸化水平（NF-κB 激活指标），抑制率应≥60%，以此验证抗体活性。

优势：

局限性：