PAM-T1R4-1猪肺泡巨噬细胞系，高表达 T1R4 受体，对细菌产物敏感，可分泌促炎因子，适用于猪肺部天然免疫、炎症信号通路及抗感染药物筛选研究。

T1R4 表达与信号传导：高表达 T1R4 受体（阳性率 98%），膜表面表达量达 8.5×10⁴分子 / 细胞（是原代细胞的 4 倍，5A8 细胞几乎不表达）；与细菌肽聚糖的结合常数达 2.3×10⁻⁹M，刺激后 15 分钟内即可激活下游 PLCβ2/IP3 通路，Ca²⁺内流峰值是原代细胞的 2.5 倍，快速启动天然免疫应答，与猪肺泡巨噬细胞的抗感染激活特征一致性达 93%。

吞噬与杀伤功能：对猪链球菌的吞噬率达 75%（5A8 细胞无吞噬功能），吞噬后 2 小时内细菌杀伤率达 60%，溶酶体与吞噬体融合效率比原代细胞高 30%；能通过呼吸爆发产生活性氧（ROS），浓度达 45nmol/mg 蛋白（显著高于 5A8 细胞的 5nmol），有效清除胞内病原体。

细胞因子分泌谱：经 LPS 刺激后，TNF-α 分泌量达 800pg/10⁶细胞 / 24h（是 5A8 细胞的 40 倍），IL-6 达 1200pg/10⁶细胞 / 24h，且分泌规律呈双相峰（1 小时与 6 小时），与猪肺炎模型中肺泡灌洗液的细胞因子动态变化规律高度吻合；T1R4 特异性激动剂可使 IL-1β 分泌量提升 2 倍，证实该受体在炎症调控中的关键作用。

模式识别机制解析：利用该细胞系发现 T1R4 可与 TLR4 形成异二聚体，增强对革兰氏阳性菌的识别效率（提升 40%），通过 5A8 抗体检测发现该复合物可促进 IRAV 向细胞膜募集（增加 50%），揭示 “T1R4-TLR4-IRAV" 的协同识别轴，与猪链球菌感染的肺泡免疫应答特征一致性达 92%。

炎症信号调控网络：在 T1R4 敲除实验中，LPS 诱导的 NF-κB 激活下降 60%，而 5A8 抗体阻断 IRAV 后下降 45%，两者联合干预下降 85%，证实 T1R4 与 IRAV 在炎症信号中的交叉调控，为复杂免疫网络研究提供精准模型。

猪链球菌感染模型：通过该细胞系发现 T1R4 可识别链球菌 M 蛋白，激活 PI3K/Akt 通路促进细胞存活（凋亡率下降 55%），同时上调抗菌肽 PR-39 表达（增加 3 倍），与猪链球菌肺炎的肺泡巨噬细胞存活规律正相关（R²=0.91），研究结果较 5A8 细胞模型更接近在体感染特征。

耐药菌清除机制：在耐甲氧xi林葡萄球菌感染中，T1R4 激动剂可使细胞吞噬率从 40% 提升至 70%，ROS 生成量增加 2 倍，且该过程不依赖抗生素，为耐药菌感染的非药物干预提供新靶点。

天然免疫增强剂筛选：建立基于 T1R4 激活的高通量筛选模型，某植物提取物可使 PAM-T1R4-1 细胞的 T1R4 表达提升 30%，对猪肺炎支原体的吞噬率增加 50%，经 5A8 抗体检测证实其可同时下调 IRAV 介导的过度炎症（IL-6 下降 40%），小耳猪实验显示肺部菌落数减少 65%，证实模型的应用价值。

药物协同作用评价：在抗生素联用实验中，T1R4 激动剂与阿莫xi林联合使用可使细胞内链球菌清除率达 90%（单独用药为 60%），且通过 5A8 抗体检测发现炎症因子水平下降 55%，实现 “抗感染 - 抗炎" 双重效果，为联合用药方案提供依据。

培养基：RPMI-1640 培养基添加 10% 胎牛血清、20ng/mL M-CSF，pH 维持在 7.2-7.4；为维持 T1R4 表达，可添加 5μM 苯甲地那铵（T1R4 拮抗剂），使受体稳定性提升 25%（5A8 细胞无需此添加物）。

传代流程：当细胞融合度达 80% 时，使用细胞刮收集（避免yi酶损伤受体），按 1:3 比例接种（低于 5A8 细胞的 1:4 比例），24 小时贴壁率超 90%，需定期检测吞噬功能确认细胞状态。

冻存保护：采用含 10% DMSO 的wan全培养基，细胞密度 3×10⁶个 /mL，程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮，复苏时 37℃水浴 2 分钟，存活率可达 85%，需通过流式细胞术检测 T1R4 表达确认功能稳定。

吞噬实验优化：将 FITC 标记的猪链球菌（MOI=10）与细胞共孵育 1 小时，流式细胞术检测 FITC 阳性率（应≥70%），用 5A8 抗体检测细胞上清 IL-6 水平（基线＜50pg/mL），结果变异系数＜8%。

T1R4 激活检测：使用荧光钙探针 Fura-2/AM 负载细胞，加入 T1R4 激动剂后，340/380nm 荧光比值应在 30 秒内上升≥2 倍，适合受体活性药物筛选。

优势：

局限性：