MH-SCD163细胞系，MH-SCD163 为稳定表达猪 CD163 的小鼠肺泡巨噬细胞系，悬浮生长，对 PRRSV 敏感性显著提升，适用于病毒跨种感染机制、受体功能及抗病du药物筛选研究。

猪 CD163 表达与定位：高表达猪 CD163 受体（膜表面分子数达 7.5×10⁴/ 细胞，亲本 MH-S 细胞几乎不表达），主要定位于细胞膜与内体膜（与 4H11 抗体识别的病毒抗原定位模式不同）；Western blot 验证显示，表达的猪 CD163 分子量为 130kDa，与天然猪肺泡巨噬细胞的 CD163 分子量一致，且能被抗猪 CD163 单克隆抗体特异性识别（4H11 抗体无交叉反应）。

PRRSV 复制支持能力：对 PRRSV 的感染效率达 98%（亲本 MH-S 细胞＜1%），病毒复制周期缩短至 16 小时（4H11 细胞无法支持病毒复制），胞内病毒 RNA 拷贝数达 10¹⁰ copies/mL（是 ST-2014S 细胞的 5 倍）；病毒释放效率达 75%，滴度稳定在 10⁸.² TCID₅₀/mL，可观察到典型的细胞融合病变（亲本细胞无病变），与猪肺泡巨噬细胞的病毒复制特征一致性达 90%。

免疫功能保留：保留小鼠巨噬细胞的天然免疫特征，表达 TLR4、TLR7 等模式识别受体，PRRSV 感染后分泌 TNF-α 达 650pg/10⁶细胞 / 24h（是 4H11 细胞的 30 倍），Ⅰ 型干扰素（IFN-β）表达量是亲本细胞的 1.5 倍，可模拟病毒感染引发的免疫应答，较单纯表达受体的非免疫细胞更接近在体状态。

受体介导的宿主限制突破：通过该细胞系发现，猪 CD163 的 scavenger receptor cysteine-rich（SRCR）域 5 是 PRRSV 跨种感染的关键（删除后病毒复制下降 99%），与小鼠同源蛋白的差异氨基酸位点（第 561 位亮an酸）决定了感染能力，4H11 抗体检测证实该过程不依赖 PCV2 等其他病毒辅助，揭示 PRRSV 宿主范围限制的分子基础。

病毒适应性变异追踪：在 MH-SCD163 细胞中连续传代 PRRSV 50 次后，病毒 ORF5 基因出现 E159K 突变，与猪 - 鼠跨种传代实验的变异规律一致（R²=0.92），该突变使病毒对小鼠巨噬细胞的感染效率提升 8 倍，为评估 PRRSV 跨种传播风险提供实验依据。

病毒入侵路径验证：利用该细胞系结合 4H11 抗体（作为阴性对照），证实 PRRSV 通过 CD163 介导的内吞途径入侵，与网格蛋白共定位率达 85%，内体酸化抑制剂可使入侵率下降 70%，明确 CD163 在病毒进入阶段的核心作用，研究结果较传统猪源细胞更易进行基因编辑验证。

受体调控网络发现：通过转录组分析发现，CD163 表达可上调小鼠巨噬细胞中 120 个与病毒复制相关的基因，其中 PI3K/Akt 通路激活是 PRRSV 复制的关键（抑制剂处理后病毒滴度下降 10⁴倍），为开发靶向宿主因子的抗病du药物提供靶点。

受体阻断剂筛选：建立基于 PRRSV-GFP 报告病毒的高通量筛选模型，某小分子化合物可特异性阻断 CD163 与 PRRSV 的结合（IC₅₀=2.3μM），在 MH-SCD163 细胞中使病毒复制下降 98%，且对 4H11 细胞无毒性（CC₅₀＞100μM），猪肺泡巨噬细胞实验验证其抑制率达 90%，具备开发潜力。

跨种抗病毒策略评估：在该细胞系中筛选出的 CD163 单克隆抗体，可同时抑制 PRRSV 对猪巨噬细胞（抑制率 85%）和 MH-SCD163 细胞（抑制率 90%）的感染，与 4H11 抗体的病毒检测功能结合，可实现 “阻断 - 验证" 一体化评价，加速广谱抗病du药物研发。

培养基与筛选：使用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基，添加 5μg/mL 嘌呤霉素（维持 CD163 表达），pH 维持在 7.2-7.4；与 4H11 细胞不同，需定期通过流式细胞术检测 CD163 表达（阳性率应＞95%），避免基因沉默导致功能丢失。

传代与维护：当细胞密度达 1×10⁶个 /mL 时，按 1:4 比例稀释传代（无需离心），24 小时存活率超 90%；为保持巨噬细胞功能，每周添加 10ng/mL M-CSF，可使吞噬能力提升 20%（4H11 细胞无需此步骤）。

冻存与复苏：采用含 10% DMSO 的wan全培养基，细胞密度 5×10⁶个 /mL，程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮，复苏时 37℃水浴 1 分钟，48 小时后检测 CD163 表达（应恢复至冻存前水平），病毒敏感性验证显示 PRRSV 滴度波动＜10%。

PRRSV 感染优化：细胞以 2×10⁵个 / 孔接种 24 孔板，接种 PRRSV（MOI=0.1）后 37℃孵育 1 小时，换液后培养 48 小时，病毒滴度可达 10⁸.² TCID₅₀/mL（4H11 细胞无法检测 PRRSV），结果变异系数＜7%，适合药物筛选实验。

受体功能验证：通过 CRISPR 技术在 MH-SCD163 细胞中敲除 CD163，病毒感染率从 98% 降至 5% 以下，可作为阴性对照验证受体依赖性，较 4H11 抗体的病毒检测更能反映功能本质。

优势：

局限性：