4A11细胞系为抗猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 蛋白鼠源单克隆抗体杂交瘤细胞系，稳定分泌高特异性抗体，适用于 PRRSV 检测、分型及疫苗免疫效果评估实验。

抗体分泌与特异性：稳定分泌 IgG1 型单克隆抗体，分泌量达 45μg/10⁶细胞 / 天（MH-SCD163 无抗体分泌功能）；通过 Western blot 验证，仅与 PRRSV GP5 蛋白（25kDa）特异性结合，与猪圆环病毒、猪流感病毒等无交叉反应，对 PRRSV 1 型和 2 型的识别率达 100%，但可区分 2 型内的不同亚型（如 VR-2332 与 JXA1 株的结合力差异达 3 倍），特异性显著优于多克隆抗体。

抗原识别表位：识别 GP5 蛋白的线性表位（第 37-51 位氨基酸），该区域为 PRRSV 的主要中和抗原位点，与 MH-SCD163 细胞表达的 CD163 受体结合区域无重叠；竞争实验证实，4A11 抗体可阻断 PRRSV 对 MH-SCD163 细胞的吸附（抑制率达 75%），具备中和活性，且对变异株的识别能力优于靶向其他抗原的抗体。

免疫学检测性能：在间接 ELISA 中，抗体效价达 1:512000，检测 PRRSV 的线性范围 0.05-200ng/mL；在免疫荧光实验中，与 MH-SCD163 感染的 PRRSV 共定位率达 99%，荧光强度是多克隆抗体的 4 倍，适合病毒定位与定量分析，且对不同亚型的荧光强度差异可用于分型鉴别。

ELISA 检测试剂盒：以 4A11 抗体为核心构建双抗夹心 ELISA，检测 MH-SCD163 培养的 PRRSV 灵敏度达 0.05ng/mL，批间变异系数＜3%，与猪血清中 PRRSV 的检出符合率达 98%（传统方法为 85%）。该试剂盒已广泛应用于基层兽医站，使 PRRSV 早期诊断率提升 40%，为疫情快速处置提供依据。

亚型鉴别体系：利用 4A11 抗体对不同 PRRSV 亚型的结合力差异，建立基于抗体亲和力的分型方法，可在 24 小时内区分高致病性与经典毒株（亲和力比值＞2.5），与基因测序结果的一致性达 96%（MH-SCD163 感染模型验证），较传统分型方法时间缩短 72 小时。

疫苗效价评估：作为 PRRSV 疫苗中和抗体检测的标准抗体，4A11 与 MH-SCD163 细胞配合使用，可精准测定疫苗诱导的中和抗体效价，与仔猪攻毒保护率的相关性达 97%（传统方法为 80%），被农业部列为疫苗批签发强制检测试剂。

疫苗生产监控：在 ST-2014S 细胞的 PRRSV 疫苗生产中，4A11 抗体用于监测病毒抗原含量，可确定最佳收获时间（GP5 蛋白含量达 5μg/mL 时），较经验性收获提高疫苗免疫原性 30%，降低生产成本 20%。

变异株监测：通过 4A11 抗体与临床分离株的结合力测定，发现 2020 年后流行的 PRRSV 毒株 GP5 蛋白第 44 位氨基酸突变（R→K）可使结合力下降 60%，该突变株在 MH-SCD163 细胞中的复制能力提升 2 倍，提示免疫逃逸风险，已指导疫苗株更新。

中和机制解析：利用 4A11 抗体发现，PRRSV 通过 GP5 蛋白与 MH-SCD163 细胞表面 CD163 的相互作用依赖构象变化，抗体结合可稳定 GP5 的闭合构象，阻止其与受体结合，该机制为设计广谱疫苗提供了结构基础。

培养基：RPMI-1640 培养基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺，pH 维持在 7.2-7.4；为提高抗体产量，可添加 10ng/mL IL-4（MH-SCD163 无需此添加），使分泌量提升 30%，适合大规模悬浮培养。

传代与放大：当细胞密度达 1×10⁶个 /mL 时，按 1:6 比例稀释传代（无需离心），24 小时存活率超 96%；放大培养采用 5L 搅拌式生物反应器，细胞密度可达 2.5×10⁶个 /mL，抗体总产量是 MH-SCD163 培养体系的 8 倍（按单位体积计）。

冻存与复苏：采用含 15% DMSO 的wan全培养基，细胞密度 6×10⁶个 /mL，程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮，复苏时 37℃水浴 1 分钟，存活率可达 92%，需通过 ELISA 验证抗体效价（应≥1:256000）。

抗体纯化：采用 Protein A 亲和层析柱纯化，纯度达 99.5%，内毒素含量＜0.03EU/mg，适合体内中和实验；纯化抗体在 4℃可稳定保存 8 个月，-20℃保存 3 年活性无显著下降。

中和实验优化：在 MH-SCD163 细胞中，4A11 抗体（5μg/mL）可使 PRRSV 的 TCID₅₀下降 10⁵倍，中和效价测定的变异系数＜5%，适合疫苗免疫效果评估。

优势：

局限性：