10F10细胞系为抗猪流行性腹泻病毒 S 蛋白鼠源单克隆抗体杂交瘤细胞系，稳定分泌高特异性抗体，适用于 PEDV 检测、分型及疫苗免疫效果评估实验。

抗体分泌与特异性：稳定分泌 IgG2a 型单克隆抗体，分泌量达 50μg/10⁶细胞 / 天（IPI-FX 无抗体分泌功能）；通过 Western blot 验证，仅与 PEDV S 蛋白（180kDa）特异性结合，与猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪 deltacoronavirus（PDCoV）等无交叉反应，对 PEDV G1 型和 G2 型的识别率达 100%，但可区分强毒株与弱毒株（如 CV777 与 attenuated DR13 株的结合力差异达 4 倍），特异性显著优于多克隆抗体。

抗原识别表位：识别 S 蛋白的构象表位（第 499-513 位氨基酸），该区域为 PEDV 的主要中和抗原位点，与 IPI-FX 细胞表达的氨肽酶 N（APN）受体结合区域重叠；竞争实验证实，10F10 抗体可阻断 PEDV 对 IPI-FX 细胞的吸附（抑制率达 85%），具备强效中和活性，且对变异株的识别能力优于靶向其他抗原的抗体。

免疫学检测性能：在间接 ELISA 中，抗体效价达 1:1024000，检测 PEDV 的线性范围 0.03-300ng/mL；在免疫荧光实验中，与 IPI-FX 感染的 PEDV 共定位率达 99.5%，荧光强度是多克隆抗体的 5 倍，适合病毒定位与定量分析，且对不同毒力株的荧光强度差异可用于毒力鉴别。

ELISA 检测试剂盒：以 10F10 抗体为核心构建双抗夹心 ELISA，检测 IPI-FX 培养的 PEDV 灵敏度达 0.03ng/mL，批间变异系数＜2%，与猪肠内容物中 PEDV 的检出符合率达 99%（传统方法为 88%）。该试剂盒已广泛应用于规模化猪场，使 PEDV 早期诊断率提升 50%，为疫情快速处置提供依据。

毒力鉴别体系：利用 10F10 抗体对不同 PEDV 毒株的结合力差异，建立基于抗体亲和力的毒力鉴别方法，可在 24 小时内区分强毒株与弱毒株（亲和力比值＞3.0），与仔猪攻毒试验结果的一致性达 98%（IPI-FX 感染模型验证），较传统鉴别方法时间缩短 96 小时。

疫苗效价评估：作为 PEDV 疫苗中和抗体检测的标准抗体，10F10 与 IPI-FX 细胞配合使用，可精准测定疫苗诱导的中和抗体效价，与仔猪攻毒保护率的相关性达 98%（传统方法为 82%），被农业部列为疫苗批签发强制检测试剂。

疫苗生产监控：在 Vero 细胞的 PEDV 疫苗生产中，10F10 抗体用于监测病毒抗原含量，可确定最佳收获时间（S 蛋白含量达 8μg/mL 时），较经验性收获提高疫苗免疫原性 40%，降低生产成本 25%。

变异株监测：通过 10F10 抗体与临床分离株的结合力测定，发现 2022 年后流行的 PEDV 毒株 S 蛋白第 505 位氨基酸突变（D→G）可使结合力下降 70%，该突变株在 IPI-FX 细胞中的复制能力提升 3 倍，提示免疫逃逸风险，已指导疫苗株更新。

中和机制解析：利用 10F10 抗体发现，PEDV 通过 S 蛋白与 IPI-FX 细胞表面 APN 的相互作用依赖构象变化，抗体结合可稳定 S 蛋白的前体构象，阻止其与受体结合，该机制为设计广谱疫苗提供了结构基础。

培养基：RPMI-1640 培养基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺，pH 维持在 7.2-7.4；为提高抗体产量，可添加 15ng/mL IL-6（4A11 添加 IL-4），使分泌量提升 35%，适合大规模悬浮培养。

传代与放大：当细胞密度达 1×10⁶个 /mL 时，按 1:7 比例稀释传代（无需离心），24 小时存活率超 97%；放大培养采用 5L 搅拌式生物反应器，细胞密度可达 3.0×10⁶个 /mL，抗体总产量是 4A11 培养体系的 1.2 倍（按单位体积计）。

冻存与复苏：采用含 15% DMSO 的wan全培养基，细胞密度 7×10⁶个 /mL，程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮，复苏时 37℃水浴 1 分钟，存活率可达 94%，需通过 ELISA 验证抗体效价（应≥1:512000）。

抗体纯化：采用 Protein G 亲和层析柱纯化，纯度达 99.8%，内毒素含量＜0.02EU/mg，适合体内中和实验；纯化抗体在 4℃可稳定保存 10 个月，-20℃保存 3 年活性无显著下降。

中和实验优化：在 IPI-FX 细胞中，10F10 抗体（3μg/mL）可使 PEDV 的 TCID₅₀下降 10⁶倍，中和效价测定的变异系数＜4%，适合疫苗免疫效果评估。

优势：

局限性：