MC3T3-E1 Subclone 14小鼠颅顶前骨细胞系
MC3T3-E1 Subclone 14小鼠颅顶前骨细胞系源于 C57BL/6 小鼠颅顶前成骨细胞，是保留完整成骨分化程序的经典模型，在成骨细胞增殖分化、骨基质形成及矿化机制研究中地位关键，因能模拟体内成骨全过程，成为骨代谢及骨疾病药物筛选的标准工具。
细胞呈长梭形或多角形，贴壁生长呈漩涡状，长径 20-25μm，核椭圆形含 1-2 个核仁，增殖期核分裂象较多。电镜下胞质富粗面内质网，分化后出现基质小泡。免疫表型显示，增殖期高表达 Runx2（90%）和 ALP（85%），分化期上调 OCN（80%）和 ColⅠ（95%），矿化期钙结节富集 OPN，表型变化与体内成骨时序一致。
体外培养以含 10% 胎牛血清的 α-MEM 为基础，37℃、5% CO₂环境下，传代周期 48 小时，倍增时间 36 小时。诱导条件下（50μg/mL 抗坏血酸、10mM β- 甘油lin酸钠），经历三阶段：增殖期（1-7 天）ALP 升高；分化期（8-14 天）ColⅠ 分泌达 20μg/mL・24h；矿化期（15-21 天）形成钙结节，钙含量 150μg/mg 蛋白，覆盖率超 60%。无诱导时 ALP 仅为诱导组 20%，连续传代 30 次分化能力稳定，冻存复苏存活率超 95%。
成骨分化受多通路协同调控。成骨诱导后，BMP/Smad 通路激活，BMP2 处理 12 小时 Smad1/5/8 磷酸化升 7 倍，Runx2 活性增 5 倍。Wnt/β-catenin 通路同步激活，β-catenin 核转位增 6 倍，协同上调 ALP 和 ColⅠ。PI3K/Akt 通路中期作用，第 7 天 p-Akt 达基础 8 倍，调控增殖向基质合成转换，通路激活有时序性，为阶段调控研究提供模型。
矿化过程与体内一致，基质小泡含高浓度钙和 ALP，融合后形成羟基磷灰石。茜素红染色显示钙结节面积随时间线性增加，第 21 天占培养面积 35%。矿化依赖 ColⅠ 网络，其抗体处理使结节减少 70%，矿化相关基因表达量高，具主动调控基础。
骨代谢研究中，雌激素处理使 ALP 升 40%，矿化结节增 50%，依赖 ERα。PTH 间歇促进矿化（钙增 30%），持续抑制（降 40%）。破骨细胞条件培养基抑制矿化 60%，上调 RANKL 2 倍，模拟骨重建环境。
药物筛选中，BMP2 模拟肽使 ALP 升 60%，矿化结节增 80%。阿仑lin酸钠使钙含量增 45%，抑制 MMP-13 活性 50%，批间差异小，适合高通量筛选。
骨疾病模型中，地塞mi松处理使 ALP 降 50%，矿化结节减 70%，ROS 增 3 倍，NAC 可逆转。高糖抑制矿化 45%，模拟糖尿病骨病，为研究提供工具。
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