技术文章
TECHNICAL ARTICLES详细介绍
来源与建立背景
形态与生长特征
功能特性
内皮标志物与功能蛋白:高表达血管内皮特异性标志物,如 CD31(阳性率 98%)、血管性血友病因子(vWF,阳性率 95%),其 vWF 分泌量达 8μg/10⁶细胞 / 天,显著高于 MPK 细胞;同时表达血管内皮生长因子受体 2(VEGFR2,阳性率 92%)和凝xue酶原激活物抑制剂 1(PAI-1),具备完整的血管舒张、凝血调节功能,能模拟动脉内皮的生理状态。
血管生成与屏障功能:在 Matrigel 基质上 24 小时内可形成完整的管状结构,管腔形成率达 90%(显著高于其他内皮细胞系),且能响应 VEGF 诱导发生迁移(迁移速率达 25μm / 小时),模拟动脉新生血管形成过程;体外构建的内皮屏障跨上皮电阻(TEER)值达 200Ω・cm²,接近体内动脉内皮的屏障功能。
病原体敏感性:对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等具有高度敏感性,猪瘟病毒感染后 48 小时出现典型细胞病变(细胞间隙增大、脱落),病毒滴度达 10⁷ TCID₅₀/mL,且病毒可通过内皮细胞扩散,模拟病毒在体内的血管播散过程。
血管疾病机制研究
动脉粥样硬化模型:在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导下,PIEC 细胞的细胞间黏附分子 1(ICAM-1)表达量提升 5 倍,单核细胞黏附率增加 4 倍,同时胆gu醇沉积明显,模拟动脉粥样硬化的早期病理变化,为解析疾病发生机制提供关键模型。
血栓形成机制解析:通过 PIEC 细胞研究凝血系统与内皮细胞的相互作用,发现凝xue酶可使细胞表面 PAI-1 表达提升 3 倍,抑制纤溶系统活性,证实内皮细胞在血栓形成中的调节作用,为抗血栓药物研发提供靶点。
抗病毒研究与疫苗开发
病毒血管嗜性研究:利用其对猪瘟病毒的敏感性,发现病毒通过结合细胞表面的硫酸乙酰肝素进入细胞,感染后可使内皮细胞屏障通透性增加 60%,揭示猪瘟病毒导致血管出血的分子机制。
疫苗效力评价:作为猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的效力检测细胞系,其病毒中和试验结果与仔猪攻毒保护率一致性达 88%,较其他细胞系提升 15%,被多家疫苗企业用于批次质量控制。
药物研发与安全性评价
抗血管生成药物筛选:基于其血管生成特性建立高通量药物筛选体系,日均可检测 150 种化合物。筛选出的新型抑制剂可使管状结构形成率下降 70%,VEGFR2 磷酸化水平降低 80%,动物实验显示其能抑制动脉新生血管形成,为肿瘤抗血管zhi疗提供候选药物。
血管毒性评价:用于评估药物对动脉内皮的损伤,某hua疗药物在该模型中的半数毒性浓度(TC₅₀)与猪体内动脉内皮损伤剂量相关性达 85%,显著高于 MPK 细胞系,为药物血管毒性早期评价提供可靠工具。
基础培养方案
培养基:DMEM 培养基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 维持在 7.2-7.4;为促进血管生成功能,可添加 20ng/mL VEGF,使 VEGFR2 表达量提升 30%。
传代流程:当细胞融合度达 70% 时,消化处理后按 1:4 比例接种,离心速度 800rpm,24 小时贴壁率超 90%,避免过度融合(>80% 会导致内皮功能下降)。
冻存保护:采用含 10% DMSO 的wan全培养基,细胞密度 1.5×10⁶个 /mL,程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮,复苏时 37℃水浴 1 分钟,接种至预涂明胶的培养瓶,存活率可达 85%。
功能实验操作
血管生成检测:细胞以 5×10⁴个 / 孔接种至 Matrigel 包被的 24 孔板,培养 6 小时后开始形成管状结构,24 小时通过 ImageJ 软件定量分析管腔长度与分支点数,结果变异系数<10%。
屏障功能检测:使用 Transwell 小室构建单层内皮屏障,培养 72 小时后通过 Millicell ERS-2 测定 TEER 值,或检测荧光标记右旋糖酐的通透性,评估屏障完整性。
优势:
动脉内皮特异性:是唯yi能稳定模拟猪髋动脉内皮功能的细胞系,血管生成与凝血调节功能显著优于 MPK 等细胞系,为动脉血管疾病研究提供专属模型。
功能完整性:保留完整的血管内皮生理功能,实验结果的生理相关性高,被国际血管生物学协会列为推荐细胞系。
病原体研究价值:对多种猪源病毒的敏感性高,能模拟病毒在血管内皮中的感染过程,研究结果的临床参考价值高。
局限性:
培养要求高:对培养表面(如明胶包被)依赖性强,培养成本是 MPK 细胞的 1.2 倍,不适合大规模生产。
血管类型局限:源自髋动脉,对静脉内皮功能的模拟有限,需与静脉内皮细胞系配合使用。
传代稳定性差:连续传代超过 100 代后血管生成能力下降 20%,需严格控制传代次数以保持功能稳定。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
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