LSC羔羊睾丸支持细胞系
LSC羔羊睾丸支持细胞系作为针对羔羊睾丸支持组织的特异性细胞模型，在反刍动物生殖发育机制、精子发生调控及生殖疾病研究领域具有重要价值。它的建立为深入探究羔羊睾丸支持细胞的分化规律、生精微环境构建以及生殖系统相关疾病的发生路径等提供了稳定的体外研究平台，对羔羊生殖机能调控和反刍动物繁育研究意义重大。
睾丸支持细胞是睾丸内的关键细胞类型，承担着营养生殖细胞、构建生精小管屏障、分泌生殖相关因子等重要功能，对精子发生和雄性生殖机能维持起着决定性作用。羔羊阶段是睾丸发育和生殖机能建立的关键时期，这一阶段支持细胞的增殖与分化直接影响成年后的繁殖能力。由于传统的体内研究难以精准解析支持细胞与生殖细胞的互作机制，且原代支持细胞培养存在传代受限、稳定性不足等问题，因此建立 LSC 羔羊睾丸支持细胞系，成为解析反刍动物生殖发育奥秘、推动繁育技术发展的重要突破口。
LSC 羔羊睾丸支持细胞系的建立经过了严谨规范的操作流程。选取健康的新生羔羊，在无菌条件下取出睾丸组织，去除被膜和血管。将睾丸实质剪切成 1mm³ 左右的小块，用含双抗的磷酸盐缓冲液反复冲洗，以清除血液和杂质。加入细胞分散液，在 37℃条件下处理 40-50 分钟，期间每隔 10 分钟轻轻吹打一次使细胞分散。收集细胞悬液，经 70μm 细胞滤网过滤后，1200r/min 离心 8 分钟，弃上清，用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养液重悬细胞，接种于培养瓶中，置于 37℃、5% CO₂恒温培养箱中进行原代培养。培养初期，每 24 小时更换一次培养液以去除非贴壁细胞，待细胞汇合度达 75% 时进行传代，目前该细胞系已稳定传代至 50 代以上，细胞活力保持在 90% 以上。
该细胞系呈现典型的不规则星形形态，细胞轮廓清晰，胞体伸展呈多角状，有多个长短不一的胞质突起，相邻细胞的突起可相互连接形成网状结构，细胞核呈圆形或椭圆形，位于细胞中央，具有较强的贴壁生长能力。生长特性研究显示，LSC 细胞在 DMEM/F12 培养液中生长状态最佳，相较于单纯 DMEM 培养液，细胞增殖速度提高约 22%；最适培养温度为 37℃，与哺乳动物体温相符；当胎牛血清浓度为 10% 时，细胞群体倍增时间最短，约为 72 小时。传代至 40 代后，细胞形态和增殖速率无明显变化，核型分析表明其染色体数目稳定（保持羔羊正常的染色体数目），遗传背景可靠，仍保留睾丸支持细胞的特性。
在功能特性方面，LSC 羔羊睾丸支持细胞系展现出丰富的生殖细胞功能。免疫荧光检测发现，细胞高表达睾丸支持细胞特异性标志物如波形蛋白、转铁蛋白和 FSH 受体，证实其支持细胞属性。该细胞系具有分泌雄激素结合蛋白（ABP）和抑制素的能力，ELISA 检测显示培养液中 ABP 浓度可达 25ng/mL，这对维持体外生精微环境具有重要意义。同时，LSC 细胞在体外可与精原细胞共培养并促进其增殖分化，共培养体系中精原细胞存活率较单独培养提高 40%，为研究支持细胞与生殖细胞的互作机制提供了理想模型。此外，该细胞系对生殖系统相关病原体如布鲁氏菌表现出一定的敏感性，感染后会出现细胞形态改变和功能异常，为研究病原体对雄性生殖机能的影响提供了良好材料。
LSC 羔羊睾丸支持细胞系在多个研究领域应用广泛。在生殖发育研究中，通过对该细胞系进行基因沉默实验，揭示了 Kit ligand 基因在精原细胞增殖中的关键调控作用；在繁育技术方面，利用该细胞系建立了体外生精模型，为人工辅助生殖技术提供了新的思路；在兽医病理学研究中，通过细胞损伤模型模拟睾丸炎病理过程，阐明了炎症因子对支持细胞功能的影响机制。
作为稳定可靠的羔羊睾丸支持细胞模型，LSC 不仅填bu了反刍动物睾丸支持细胞长期体外培养的空白，更为反刍动物生殖生物学及繁育技术研究提供了重要工具，推动了羔羊生殖机能调控和优良品种培育技术的发展，对提升畜牧业生产效益具有重要意义。
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