CHO-BAT-KF fut8(-/-)中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，悬浮生长，敲除 fut8 基因，低岩藻糖修饰，适用于生物药生产、糖基化研究及抗体药效优化，应用前景显著。

来源与构建：该细胞系以 CHO-BAT-KF 细胞为亲本（本身具有高表达重组蛋白的特性），通过 CRISPR/Cas9 系统靶向敲除 fut8 基因，经嘌呤霉素抗性筛选及测序验证获得双等位基因敲除株，“fut8 (-/-)" 明确标识其基因敲除特征。构建过程中采用 sgRNA 靶向 fut8 基因第 2 外显子，结合同源定向修复（HDR）引入终止密码子，确保岩藻糖基转移酶活性缺失，岩藻糖修饰水平下降 95% 以上（通过 LC-MS 检测）。

形态与增殖：体外培养呈上皮样形态，以悬浮生长为主，可形成松散小聚集体（直径＜50μm），细胞圆润饱满，活力长期维持在 90% 以上。在 37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 30-36 小时，适应无血清化学限定培养基（如 CD CHO Medium），高密度培养时细胞密度可达 8×10⁶个 /mL，传代 60 次以上仍保持稳定生长速率，岩藻糖修饰水平无反弹。

表达特征：该细胞系生产的重组蛋白（如单克隆抗体）具有特定糖谱：N - 糖链岩藻糖含量＜5%（亲本细胞约 30%-50%），同时保留核心岩藻糖以外的其他糖基化修饰（如半乳糖、唾液酸）。以抗 HER2 抗体为例，其 ADCC 活性比亲本细胞生产的抗体提升 3-5 倍（通过 NK 细胞杀伤实验验证），且热稳定性与半衰期无明显变化，生物活性更接近理想治疗特性。

优势：fut8 基因敲除效果稳定，岩藻糖修饰水平极低且稳定，长期传代后无反弹；生产的重组蛋白 ADCC 活性显著提升，无需额外工程化改造即可优化药效；兼容悬浮高密度培养，重组蛋白表达量达 3-5g/L（与亲本细胞相当），满足工业化生产需求；糖基化均一性高，批间差异小，降低药物质量控制难度。

局限性：敲除 fut8 可能导致部分蛋白的分泌效率下降（约 10%-15%），需通过培养基优化补偿；缺失岩藻糖修饰可能影响少数蛋白的构象稳定性，需针对具体靶点验证；培养成本高于普通 CHO 细胞，无血清培养基需添加特定营养因子（如脂类混合物）维持活性。

培养条件：使用无血清化学限定培养基，添加 1× 抗结块剂，37℃、5% CO₂悬浮培养（搅拌速率 120-150 rpm）。传代时维持细胞密度在 2×10⁵-6×10⁶个 /mL，避免过度稀释影响增殖。流加培养时补加葡萄糖与氨基酸混合物，可进一步提升蛋白表达量。

质控与安全：定期通过测序验证 fut8 基因敲除状态，LC-MS 检测重组蛋白岩藻糖修饰水平（确保＜5%）；STR 鉴定排除交叉污染，支原体检测阴性。冻存使用含 10% DMSO 的无血清冻存液，梯度降温后保存于液氮，复苏后传代 3 次待状态稳定后用于生产，保证蛋白质量一致性。