CHO-D3a中国仓鼠卵巢细胞株细胞系，上皮样，贴壁或悬浮生长，遗传稳定，蛋白表达高效，适用于重组蛋白生产、药物研发及基因工程研究，应用前景广阔。

来源与驯化：该细胞系源自 CHO-K1 细胞，通过多轮克隆筛选与培养基适应性驯化获得：初期以高表达重组人gan扰素 -γ 为指标，筛选高分泌单克隆；后续经无血清培养基逐步适应，增强悬浮生长能力与蛋白表达稳定性，最终获得 CHO-D3a 株系。其名称中的 “D3a" 源自驯化过程中第 3 代筛选的优势克隆亚系，标识其经过系统优化的特性。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，可灵活适应贴壁与悬浮两种生长模式，悬浮培养时形成直径 20-60μm 的松散聚集体，细胞圆润饱满，边缘清晰，活力长期维持在 93% 以上。在 37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 26-32 小时，适应多种无血清化学限定培养基（如 CHO-S-SFM II、CD FortiCHO），高密度流加培养时细胞密度可达 1.0×10⁷个 /mL，传代 120 次以上仍保持稳定生长速率，蛋白表达量衰减＜8%，冻存复苏后存活率超 90%。

表达特征：该细胞系的核心优势在于重组蛋白高表达与质量均一性：转染外源基因后，抗体类蛋白表达量可达 5-7g/L（流加培养条件下），较普通 CHO-K1 提升 35%-50%；分泌的重组蛋白糖基化修饰稳定，岩藻糖含量、半乳糖基化比例等关键质量属性批间差异＜6%（UPLC 检测），且蛋白聚合体含量＜1%（SEC-HPLC 检测），远超生物药质量标准要求。

优势：遗传稳定性优异，长期传代后生物学特性无明显变化，实验重复性强；蛋白表达量高且质量均一，降低生物药生产的质量控制难度；兼容多种培养模式与培养基，从实验室小规模培养到工业级生物反应器生产均可无缝衔接；对基因编辑工具（如 CRISPR/Cas9）的耐受性好，便于进行细胞系改造与功能优化。

局限性：部分含复杂糖基化修饰的蛋白（如某些凝xue因子）表达时，唾液酸含量略低于人源细胞，需通过糖基转移酶工程改造优化；悬浮培养时聚集体大小易受搅拌速率影响，需精准控制工艺参数；初始克隆筛选周期较长（约 2-3 个月），不适合快速临时表达需求。

培养条件：贴壁培养可使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基，悬浮培养推荐无血清化学限定培养基，添加必要的微量元素与抗氧化剂。37℃、5% CO₂环境中，搅拌速率控制在 100-140 rpm（悬浮培养），传代时维持细胞密度在 3×10⁵-8×10⁶个 /mL，避免密度过高导致代谢物积累。流加培养阶段，补加葡萄糖（维持浓度 3-5g/L）与氨基酸混合液，可延长蛋白分泌期至 14 天以上。

质控与安全：定期通过 STR 鉴定确认细胞身份，排除交叉污染；采用 ELISA 或 HPLC 检测重组蛋白表达量与纯度，确保稳定性；支原体检测需为阴性，内毒素水平控制在 0.1EU/mL 以下。冻存使用含 10% DMSO 的无血清冻存液，梯度降温后保存于液氮，复苏后传代 2-3 次待状态稳定后用于生产，保证产品质量一致性。