CHO-S-4中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，悬浮生长性能优异，蛋白表达量高，遗传背景稳定，适用于重组蛋白大规模生产、生物药工艺开发及表达系统优化。

来源与驯化：该细胞系源自 CHO-S 亲本株，经无血清培养基适应性驯化与单细胞克隆筛选获得。通过在 125mL 摇瓶中连续传代 60 次，逐步提高转速（从 100rpm 增至 140rpm）并降低血清浓度（从 5% 降至 0%），最终筛选出第 4 株悬浮性能zuiyou的克隆（“S-4" 标识筛选批次与编号）。驯化过程未引入基因编辑，仅通过表型筛选实现，确保细胞遗传背景的稳定性，全基因组测序显示与 CHO-S 亲本相似度＞99.9%。

形态与增殖：体外培养呈上皮样形态，悬浮生长时呈圆形或短梭形，形成直径 15-30μm 的均一聚集体（聚集体比例＜10%），显著优于普通 CHO-S（聚集体比例 25%-30%）。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 26-30 小时，较亲本缩短 4-6 小时，无血清悬浮培养密度可达 1.8×10⁷个 /mL（流加培养），活率长期维持在 90% 以上，传代 150 次以上生长性能无明显衰减，冻存复苏后存活率超 92%。

功能特征：核心优势在于蛋白表达与悬浮适应性的协同优化：转染外源基因后，重组蛋白表达量达 8-12g/L（流加培养），较普通 CHO-S 提升 30%-50%，且产物均一性高（聚合体比例＜2%）。其分泌途径更高效，内质网应激标志物 GRP78 表达量较亲本降低 40%，表明蛋白折叠与分泌能力增强；同时，对剪切力耐受性显著提升（可耐受 160rpm 搅拌速率），为生物反应器放大提供便利。

悬浮种子培养：

流加培养工艺：

冻存流程：取对数生长期细胞（密度 6-8×10⁶个 /mL，活率＞95%），1000rpm 离心 5 分钟，用冻存液（90% 无血清培养基 + 10% DMSO）重悬至 1×10⁷个 /mL，分装至冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜，次日转移至液氮保存，保存期可达 7 年以上，复苏后无需适应即可直接悬浮培养。

优势：悬浮生长性能优异，聚集体少且均一度高；无血清适应能力强，可直接放大至数千升反应器；重组蛋白表达量高（8-12g/L）且稳定性好；对剪切力与工艺波动耐受性强，适合工业化生产；培养周期短（10-14 天），生产效率高。

局限性：对培养基营养成分敏感，需使用高质量无血清培养基（成本较高）；高细胞密度下易积累乳酸（＞3g/L 时抑制生长），需优化流加策略；部分复杂糖蛋白（如含多天线糖型）的糖基化完整性略低于贴壁 CHO 细胞。