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Marc-145XF猴胎肾细胞系
产品型号:BY-1397
简要描述:

Marc-145XF猴胎肾细胞系,上皮样,悬浮生长,对 PRRSV 敏感性高,支持高效复制,适用于病毒大规模培养及疫苗工业化生产,性能稳定。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

Marc-145XF猴胎肾细胞系
Marc-145XF猴胎肾细胞系是 Marc-145 细胞经无血清悬浮驯化获得的衍生株,保留对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的高度敏感性,同时具备高效悬浮生长能力,是病毒大规模培养及疫苗工业化生产的核心细胞模型。其 “XF" 后缀代表 “无血清培养适应性"(Xeno-Free),标志着该细胞系在无动物源成分条件下的稳定生产性能,为生物制品的安全性与规模化生产提供了革新性平台。
一、细胞起源与生物学特性
  1. 来源与驯化机制

Marc-145 细胞源自非洲绿猴胎肾细胞 MA104 的克隆株,而 Marc-145XF 通过分步驯化获得:以贴壁 Marc-145 为起始,在含化学成分限定培养基(CDM)中逐步降低血清浓度(从 5% 至 0),同时优化搅拌速率(从 50rpm 提升至 120rpm),经 40 代传代筛选,最终获得可在无血清悬浮环境中稳定生长的细胞群体。其驯化机制与细胞表面黏附分子(如 CD44)表达下调、细胞骨架蛋白(如 β- 肌动蛋白)重排相关,使细胞摆脱对贴壁基质的依赖,形成直径 50-100μm 的松散细胞团。
  1. 形态与生长特征

细胞呈上皮样与圆形混合形态,悬浮生长时以单细胞及小细胞团(含 5-20 个细胞)为主,胞质均匀,核质比高,较亲本贴壁细胞形态更圆润。在 37℃、5% CO₂的生物反应器中,使用无血清 CDM 培养基(含重组胰岛素、转铁蛋白),倍增时间约 28-32 小时,比生长速率(μ)达 0.025/h,显著高于贴壁 Marc-145 细胞(0.018/h)。细胞密度可稳定维持在 2×10⁶-4×10⁶ cells/mL,最高密度达 6×10⁶ cells/mL(灌流培养条件),连续传代 80 次后生长特性无显著变化,冻存复苏存活率超 95%。
  1. 功能特性

  • 病毒敏感性:对 PRRSV 的感染效率达 95% 以上(流式细胞术检测 N 蛋白),48 小时病毒滴度达 10⁷.⁵-10⁸.⁵ TCID₅₀/mL,与贴壁细胞相当;对 PRRSV 的美洲型、欧洲型及高致病性变异株均具有广谱适应性,滴度差异<0.3 个数量级,优于其他猴源悬浮细胞系(如 Vero-S)。

  • 受体表达:PRRSV 主要受体 CD163 的表达量达 1.1×10⁵分子 / 细胞(流式检测),与贴壁 Marc-145 无显著差异,为病毒入侵提供充足分子基础。

  • 代谢特征:葡萄糖消耗速率为 22 mg/10⁶ cells / 天,乳酸积累速率较贴壁细胞降低 35%(仅 0.18 g/10⁶ cells / 天),谷an酰胺利用率提升 20%,更适合高密度长时间培养,可延长病毒复制平台期至 72 小时。

二、核心应用领域
  1. PRRSV 疫苗规模化生产

  • 灭活疫苗生产:在 500L 搅拌式生物反应器中,Marc-145XF 细胞密度达 3×10⁶ cells/mL,PRRSV 病毒滴度稳定在 10⁸ TCID₅₀/mL,单批次病毒产量达 1.5×10¹¹ TCID₅₀,可生产 1500 万剂灭活疫苗,较传统转瓶工艺效率提升 15 倍,生产成本降低 50%。疫苗中宿主细胞蛋白残留量<20ng / 剂,无血清培养体系避免了血清源性过敏原,使疫苗过敏反应发生率下降 40%(临床试验数据)。

  • 弱毒疫苗株筛选:利用其高效病毒复制能力,可快速评估疫苗株的减毒特性与免疫原性。例如,在该细胞系中连续传代 PRRSV 获得的弱毒株,对仔猪的致病力下降 90%,且免疫后中和抗体效价达 1:256,保护率超 90%,为弱毒疫苗开发提供候选株。

  1. 病毒学基础研究与高通量筛选

  • 复制动力学研究:通过悬浮培养的均一性,精准测定 PRRSV 的复制参数:潜伏期 5-6 小时,对数生长期 12-24 小时,稳定期 24-60 小时,为优化疫苗生产的收获时间提供数据支撑(最佳收获点为 48-54 小时)。

  • 抗病du药物筛选:在 384 孔悬浮培养板中,可实现日均 1000 种化合物的高通量筛选。例如,筛选出的 PRRSV 3CL 蛋白酶抑制剂在该模型中 EC₅₀=0.8μM,与动物实验结果一致性达 0.94,为抗 PRRSV 药物研发提供先导分子。

  1. 其他病毒培养拓展应用

  • 猪圆环病毒 2 型(PCV2)共培养:可支持 PCV2 与 PRRSV 的共感染,模拟临床混合感染场景,共感染时两种病毒滴度与单独感染差异<10%,为研究病毒间相互作用提供模型。

  • 病毒样颗粒(VLP)表达:作为杆状病毒载体的宿主细胞,可高效表达 PRRSV S 蛋白 VLP,产量达 8μg/10⁶ cells,纯度超 95%,免疫小鼠后诱导的中和抗体效价与灭活疫苗相当,为亚单位疫苗研发提供低成本生产平台。

三、培养与实验操作要点
  1. 基础培养方案

  • 培养基:无血清 CDM 培养基(含 5μg/mL 重组胰岛素、3μg/mL 转铁蛋白),添加 4mM L - 谷an酰胺,pH 维持在 7.2-7.4,需每日监测葡萄糖浓度(维持>1.5g/L)与溶氧(30%-50%)。

  • 传代流程:取对数生长期细胞悬液,1000rpm 离心 5 分钟,弃上清后用新鲜培养基重悬,按初始密度 8×10⁴ cells/mL 接种至摇瓶(转速 110rpm)或生物反应器,避免细胞团过大(>150μm)导致营养不均。

  • 冻存保护:取密度 3×10⁶ cells/mL 的细胞,加入含 10% DMSO 的无血清冻存液,程序降温后液氮保存,复苏时 37℃水浴快速解冻,直接接种至预热培养基(无需离心洗涤),24 小时后细胞存活率>90%。

  1. 病毒培养与放大工艺

  • PRRSV 接种:细胞密度达 2×10⁶ cells/mL 时,按 MOI=0.001 加入病毒液,维持搅拌速率 120rpm,溶氧 50%,感染后 36 小时补加 30% 体积的新鲜培养基(含 2× 谷an酰胺),48-54 小时收获病毒液,通过 0.45μm 滤膜澄清。

  • 生物反应器控制:采用 pH-stat 补料策略,当 pH>7.3 时自动补加 500g/L 葡萄糖溶液,维持代谢稳定,可使病毒滴度提升 15%-20%。

四、优势与局限性
  • 优势

  1. 工业化生产能力:悬浮培养可通过生物反应器实现大规模扩增,单批次产量满足千wan级疫苗需求,适合 PRRS 疫情暴发时的应急生产。

  1. 安全性提升:无血清培养体系减少动物源成分污染风险,符合 WHO 生物制品 GMP 标准,疫苗质量更易控制。

  1. 成本效益显著:较贴壁培养减少 90% 的培养面积,人力成本降低 60%,且病毒单位体积产量提升 5-8 倍。

  • 局限性

  1. 培养基成本高:无血清 CDM 培养基价格为传统血清培养基的 6-8 倍,初期投入较高。

  1. 技术门槛:需掌握悬浮细胞计数、生物反应器参数调控等技能,对操作人员要求严格。

  1. 病毒谱较窄:主要适用于 PRRSV 培养,对其他病毒(如猪瘟病毒)的支持能力有限。

五、研究意义与展望
Marc-145XF 细胞系的建立推动了 PRRSV 疫苗生产技术的升级,其无血清悬浮培养工艺使疫苗产量与安全性得到双重提升,为*养猪业 PRRS 防控提供了关键支撑。技术层面,其驯化策略为其他贴壁细胞(如 MDCK、BHK-21)的悬浮改造提供了参考范式。未来,通过基因编辑技术过表达 CD163 与 CD151(辅助受体),有望进一步提升病毒产量;结合连续灌流培养与在线监测技术,可实现 PRRSV 疫苗的连续化生产,推动兽用生物制品向智能化、高效化方向发展。

 以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

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