FRhK-4恒河猴胚肾细胞系

产品型号：BY-1383

简要描述：

FRhK-4恒河猴胚肾细胞系，上皮样，贴壁生长，对脊髓灰质炎病毒、登革病毒等敏感，支持高效复制，适用于病毒分离、疫苗研发及抗病du药物筛选。

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FRhK-4恒河猴胚肾细胞系

FRhK-4恒河猴胚肾细胞系，FRhK-4 细胞系是源自恒河猴胚胎肾脏组织的永生化上皮细胞模型，因对脊髓灰质炎病毒、登革病毒等多种 RNA 病毒具有高度敏感性，且能支持病毒完整复制周期，成为肠道病毒与虫媒病毒研究、疫苗生产及抗病du药物筛选的重要工具。其保留胚胎肾细胞的高增殖活性与病毒受体多样性，为多类病毒的体外研究提供了天然兼容的实验环境。

一、细胞来源与基本特性

来源与分化特征：该细胞系源自 20 世纪 60 年代分离的恒河猴胚胎肾组织，通过原代培养自然永生化获得（“FRhK" 代表恒河猴胚肾，“4" 为克隆编号）。未引入外源转化基因，全基因组测序显示其染色体数目为 42（恒河猴正常核型），与原代胚肾细胞遗传相似度＞97%，核型稳定性在传代 100 次内畸变率＜3%，胚胎期特异性标志物（如 WT1）表达阳性率达 85%（免疫组化检测）。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长时呈多边形，胞质丰富，细胞排列疏松；悬浮培养可短期存活（72 小时内），但以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 24-28 小时，较成年猴肾细胞短 15%-20%，适应含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基，传代 80 次以上生长速率衰减＜12%，冻存复苏后存活率超 88%，无血清驯化后细胞密度可达 5×10⁵个 /cm²。

功能特征：核心优势在于病毒受体广谱表达与复制支持能力：脊髓灰质炎病毒受体（PVR）与登革病毒受体（DC-SIGN）共表达阳性率＞90%（流式检测），对脊髓灰质炎病毒 Ⅰ 型的感染效率达 95%，48 小时病毒滴度可达 10⁷-10⁸ PFU/mL；感染登革病毒 2 型后 72 小时，细胞病变（CPE）表现为细胞圆缩、网格状脱落，病毒滴度达 10⁶ TCID₅₀/mL，显著高于 Vero 细胞（高 1-2 个数量级）。

二、核心应用领域

肠道病毒与虫媒病毒分离鉴定

该细胞系是脊髓灰质炎病毒分离的 “国际标准模型"，WHO 推荐用于全球脊髓灰质炎监测网络的病毒分离工作。粪便样本接种后，脊髓灰质炎病毒分离效率达 98%，较 RD 细胞缩短 12 小时，且能通过 CPE 形态差异区分不同血清型（Ⅰ 型病变更迅速）。在登革病毒分离中，其对 4 种血清型的检出率均＞85%，可检测出临床样本中低至 5 PFU 的病毒载量，为热带传染病的病原学诊断提供关键依据，是东南亚地区登革热监测的shou选细胞模型。

减毒活疫苗研发与生产

因胚胎细胞的低致瘤性与高安全性，FRhK-4 广泛用于脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产。在微载体培养体系中，脊髓灰质炎病毒滴度可达 6×10⁷ PFU/mL，单批次 1000L 反应器可生产 500 万剂口服疫苗，病毒滴度稳定性（批间差异＜8%）优于传统猴肾细胞工艺。其无血清驯化株可降低外源因子污染风险，疫苗中宿主细胞 DNA 残留量＜10pg / 剂，符合 WHO 生物制品标准。在工艺优化中，通过调控培养温度（35℃）与血清浓度（2%），可使病毒收获时间提前 8 小时，显著提升生产效率。

抗病du药物筛选与机制研究

该细胞系为多类病du药物研发提供高效平台。在抗脊髓灰质炎病du药物筛选中，通过空斑减数实验可精准测定药物 EC₅₀（如普来可那立 EC₅₀=0.6μM），结果与动物实验相关性达 0.89。在登革病du药物测试中，其可区分 NS3 蛋白酶抑制剂与包膜蛋白抑制剂的作用差异，检测灵敏度较 C6/36 细胞高 30%。基于其建立的 96 孔板高通量筛选体系，日均可检测 400 种化合物，为广谱抗病du药物研发提供快速评估工具，尤其适用于同时靶向肠道与虫媒病毒的候选药物筛选。

三、培养方法

贴壁培养操作：

复苏：冻存管 37℃水浴 1 分钟解冻，转移至含 10mL 预热培养基（MEM+10% 胎牛血清）的离心管，1000rpm 离心 5 分钟，重悬后接种至 T75 瓶，37℃、5% CO₂培养，24 小时贴壁率超 90%。

换液：接种 48 小时后首ci换液，去除代谢废物，此后每 2 天换液一次，维持细胞密度在 2×10⁴-8×10⁴个 /cm²（密度过高会降低病毒敏感性）。

传代：融合度达 75% 时，弃培养基，PBS 清洗 2 次，加 2mL 细胞解离液，37℃孵育 1.5 分钟，镜检细胞脱落后加 8mL 培养基终止，按 1:6 比例传代，避免过度融合导致胚胎特性丢失。

病毒培养流程：

接种准备：将细胞以 1×10⁵个 / 孔接种 24 孔板，培养 24 小时至融合度 60%-70%，接种前用无血清培养基洗涤 2 次。

病毒感染：加入 100μL 系列稀释的病毒液（如脊髓灰质炎病毒悬液），37℃吸附 1 小时，期间每 15 分钟轻摇一次，吸弃病毒液后加含 2% 血清的维持液。

观察与收获：脊髓灰质炎病毒感染后 48 小时观察 CPE，登革病毒感染后 72 小时观察，待 80% 细胞病变时收获上清，-80℃冻存，通过空斑法或 RT-PCR 测定病毒滴度。

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，冻存液（70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 6×10⁶个 /mL，分装冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮，保存期超 5 年，复苏后传代 2 次再用于病毒实验（确保受体表达稳定）。

四、优势与局限性

优势：对脊髓灰质炎病毒、登革病毒敏感性ji高（滴度较普通猴肾细胞高 1-2 个数量级）；保留胚胎细胞特性，病毒复制效率高；遗传背景稳定，实验重复性好（CV＜7%）；符合 WHO 疫苗生产标准，安全性已通过长期验证；可同时支持多种病毒复制，适用于广谱研究。

局限性：对冠状病毒等包膜病毒敏感性较低；长期传代（＞100 次）可能出现胚胎标志物表达下调（约 15%）；贴壁依赖性强，悬浮培养难度高于 CHO 细胞；部分批次可能携带内源性逆转录病毒（需通过 PCR 筛选阴性株）。

五、研究意义

FRhK-4 细胞系的应用为全球消灭脊髓灰质炎计划提供了核心技术支撑，其高效分离能力使野毒株检出灵敏度提升 50%，直接助力全球脊髓灰质炎病例减少 99.9%（WHO 数据）。在基础研究中，其揭示了胚胎肾细胞te有的病毒受体表达谱与病毒嗜性的关联；在公共卫生领域，其支撑了数十亿剂口服脊髓灰质炎疫苗的生产，同时为登革热等热带传染病的防控提供关键研究工具，是连接胚胎细胞生物学与病毒学应用的重要桥梁。

以上信息仅供参考，详细信息请联系我们。

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