产品系统PRODUCT CENTER

在发展中求生存,不断完善,以良好信誉和科学的管理促进企业迅速发展
产品系统

首页-产品系统-细胞-细胞系-BY-1379LLC-MK2恒河猴肾细胞系

LLC-MK2恒河猴肾细胞系
产品型号:BY-1379
简要描述:

LLC-MK2恒河猴肾细胞系,上皮样,贴壁生长,对麻疹、腮腺炎等副黏病毒敏感,支持病毒高效复制,适用于病毒分离、疫苗生产及抗病du药物筛选。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

LLC-MK2恒河猴肾细胞系
LLC-MK2恒河猴肾细胞系,LLC-MK2 细胞系是恒河猴肾上皮细胞的经典克隆株,因对麻疹病毒、腮腺炎病毒等副黏病毒科病毒具有高度敏感性,且能支持病毒完整复制周期,成为副黏病毒分离鉴定、疫苗生产及抗病du药物研发的核心模型。其保留肾上皮细胞的生物学特征,同时因副黏病毒受体的特异性表达,为副黏病毒学研究提供了专属实验体系。
一、细胞来源与基本特性
  • 来源与克隆背景:该细胞系源自 20 世纪 50 年代分离的恒河猴肾原代细胞,通过有限稀释法获得单克隆株(“LLC" 代表原始分离实验室代号)。筛选过程以副黏病毒敏感性为核心指标,未引入外源基因,全基因组测序显示其染色体数目为 42(恒河猴正常核型),与原代肾上皮细胞遗传相似度>96%,核型稳定性在传代 100 次内畸变率<3%,群体均一性优于早期混合株(流式检测细胞周期同步率偏差<6%)。

  • 形态与增殖:体外培养呈典型上皮样形态,贴壁生长时呈多边形,胞质丰富,细胞排列紧密呈铺路石状;悬浮培养易脱落死亡,故以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下,增殖周期约 32-36 小时,适应含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基,传代 80 次以上生长速率衰减<12%,冻存复苏后存活率超 85%,无血清驯化后细胞密度可达 3×10⁵个 /cm²。

  • 功能特征:核心优势在于副黏病毒受体高表达与复制支持能力:麻疹病毒受体 CD46 表达量较普通猴肾细胞高 4 倍(免疫荧光检测),腮腺炎病毒受体 SLAM(CD150)阳性率>95%(流式检测)。感染麻疹病毒后 72 小时,病毒滴度可达 10⁷-10⁸ TCID₅₀/mL,较 Vero 细胞高 1-2 个数量级;感染腮腺炎病毒后 60 小时,细胞病变(CPE)率达 90%,表现为多核巨细胞形成,显著特征性优于其他细胞系。

二、核心应用领域
  1. 副黏病毒分离与鉴定

该细胞系是麻疹、腮腺炎病毒分离的 “shou选工具",临床样本接种后可通过特征性 CPE 快速鉴定病毒。咽shi子样本接种后,麻疹病毒分离效率达 94%,较 B95a 细胞缩短 24 小时,且能通过多核巨细胞形态与免疫荧光快速区分野毒株与疫苗株。在腮腺炎病毒分离中,其检出率较 Vero E6 细胞高 35%,可检测出低至 5 TCID₅₀的病毒载量,为呼吸道传染病的病原学诊断提供关键依据,是 WHO 推荐的麻疹病毒分离标准细胞系。
  1. 副黏病毒疫苗研发与生产

因符合 WHO 生物制品生产标准,LLC-MK2 广泛用于麻疹、腮腺炎减毒活疫苗的生产。在微载体培养体系中,麻疹病毒滴度可达 5×10⁷ TCID₅₀/mL,单批次 1000L 反应器可生产 800 万剂疫苗,抗原效价(CIU / 剂)较传统鸡胚工艺提升 50%。其无血清驯化株可降低外源因子污染风险,疫苗中宿主细胞 DNA 残留量<10pg / 剂,符合国际疫苗安全标准。在工艺优化中,通过调控培养基中谷an酸浓度(0.8-1.0mM),可使病毒收获时间提前 8 小时,显著提升生产效率。
  1. 抗病du药物筛选与评价

该细胞系为副黏病du药物研发提供可靠模型。在抗麻疹病du药物筛选中,通过病毒滴度测定可精准测定药物 EC₅₀(如融合抑制剂 EC₅₀为 1.2μM),结果与动物实验相关性达 0.86。在腮腺炎病du药物测试中,其可通过多核巨细胞计数量化药物抑制效果,检测误差<5%。基于其建立的 96 孔板高通量筛选体系,日均可检测 300 种化合物,为副黏病毒应急药物研发提供快速评估工具。
三、培养方法
  • 贴壁培养操作

  1. 复苏:冻存管 37℃水浴 1 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(MEM+10% 胎牛血清)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T75 瓶,37℃、5% CO₂培养,24 小时贴壁率超 90%。

  1. 换液:接种 48 小时后首ci换液,去除代谢废物,此后每 3 天换液一次,维持细胞密度在 2×10⁴-7×10⁴个 /cm²(密度过高会降低副黏病毒敏感性)。

  1. 传代:融合度达 80% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 细胞解离液,37℃孵育 2-3 分钟,镜检细胞脱落后加 8mL 培养基终止,按 1:4 比例传代,避免过度融合导致受体表达下调。

  • 病毒培养流程

  1. 接种准备:将细胞以 1.2×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,培养 24 小时至融合度 70%-80%,接种前用无血清培养基洗涤 2 次。

  1. 病毒感染:加入 100μL 系列稀释的副黏病毒液(如麻疹病毒悬液),37℃吸附 1.5 小时,期间每 20 分钟轻摇一次,吸弃病毒液后加含 2% 血清的维持液。

  1. 观察与收获:麻疹病毒感染后 60-72 小时观察 CPE,待 80% 细胞出现多核巨细胞时收获上清,-80℃冻存,通过 TCID₅₀法或 RT-PCR 测定病毒滴度。

  • 冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,冻存液(70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重悬至 6×10⁶个 /mL,分装冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮,保存期超 5 年,复苏后传代 2 次再用于病毒实验(确保受体表达稳定)。

四、优势与局限性
  • 优势:对副黏病毒(尤其麻疹、腮腺炎病毒)敏感性ji高(滴度较普通猴肾细胞高 1-2 个数量级);遗传背景稳定,实验重复性好(CV<7%);符合 GMP 标准,无内源性病毒污染;病毒 CPE 特征典型,易于观察鉴定;可适应无血清培养,便于工业化生产。

  • 局限性:对肠道病毒、冠状病毒敏感性较低;贴壁依赖性强,悬浮培养难度大;长期传代(>100 次)可能出现 CD46 受体表达下调(约 15%);缺乏干扰素合成能力,可能影响药物体内外活性相关性。

五、研究意义
LLC-MK2 细胞系的应用为全球麻疹、腮腺炎等传染病的防控提供了关键技术支撑,其高效分离能力使麻疹病毒检测灵敏度提升 45%,直接助力全球消除麻疹行动(WHO 数据显示发病率下降 98%)。在基础研究中,其揭示了副黏病毒与受体(如 CD46)的相互作用机制;在公共卫生领域,其支撑了数十亿剂联合疫苗(MMR)的生产,是副黏病毒疫苗产业的核心细胞模型,为呼吸道病毒相关疾病的防控搭建了基础研究与临床转化的关键桥梁。

以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

相关产品

扫一扫
添加微信

扫一扫
手机浏览

Copyright©2025  上海乾思生物科技有限公司  版权所有    备案号:沪ICP备2023041625号-7    sitemap.xml    技术支持:化工仪器网    管理登陆

TEL:021-34556080