EBTr (NBL-4)牛胚气管细胞系
EBTr (NBL-4)牛胚气管细胞系作为牛源呼吸道研究的经典贴壁模型，以其稳定的气管上皮细胞功能和高效的呼吸道病毒增殖特性，在牛呼吸道生理机制解析、病毒性气管炎模型构建及兽用呼吸道疫苗研发中具有不可替代的地位。与 MDBK (NBL-1) 牛肾细胞系的肾脏研究定位不同，该细胞系源自牛胚胎气管组织，为探索牛呼吸道的防御功能及相关疾病提供了贴近在体状态的实验载体。
细胞起源与生物学特性
该细胞系源自健康牛胚胎的气管黏膜组织，通过 0.1%yi酶与 0.05% EDTA 联合消化法获得原代气管上皮细胞后，经气管特异性标志物细胞角蛋白 5（CK5）免疫荧光筛选纯化建立。其核心特征是高纯度保留牛胚气管上皮细胞的幼稚表型：CK5 阳性率达 98%，气管纤毛相关蛋白 Foxj1 表达率 95%，而成纤维细胞标志物波形蛋白阳性率低于 1%，细胞纯度较传统组织块培养法提升 62%，显著高于 MDBK 的肾脏特异性表达模式。
细胞形态呈现典型的柱状上皮样，胞体高度约 25-30μm，直径约 12-15μm，较 MDBK 的立方上皮细胞更高，细胞核呈椭圆形（核质比约 1:3.8），排列呈假复层结构，与胚胎期气管上皮细胞的形态吻合度达 94%。培养体系需精准调控：含 15% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基（添加 10ng/mL 表皮生长因子和 20μg/mL 维生素 A），在 37℃、5% CO₂环境下贴壁生长，倍增时间约 40-44 小时（长于 MDBK）。传代需在细胞融合度达 75%-80% 时进行，采用 1:3 比例接种，过度密集会导致纤毛分化受阻（纤毛形成率下降 45%）。
功能验证显示，该细胞系保留关键呼吸道功能：黏液蛋白 MUC5AC 分泌速率达 18μg/(10⁶细胞・24h)，纤毛摆动频率稳定在 12-15 次 / 秒，连续传代 25 次后仍保持核型稳定（60 条染色体，与牛物种核型一致），无支原体及牛源呼吸道病原体污染，对牛呼吸道合胞病毒的敏感性显著高于 MDBK（感染率达 99%）。
核心应用领域
牛呼吸道生理防御研究
EBTr (NBL-4) 细胞系是解析牛气管黏膜防御机制的理想模型。在黏膜免疫研究中，该细胞系表现出典型的呼吸道特异性：脂多糖刺激后，抗菌肽 β- 防御素表达量增加 9.2 倍，而 MDBK 在相同处理下仅上升 1.3 倍。通过该模型发现，牛胚气管上皮细胞中存在独te的 Toll 样受体 4（TLR4）分布模式（顶端膜高密度表达），是其快速识别呼吸道病原体的关键，为理解牛呼吸道的先天性免疫优势提供了直接证据。此外，其纤毛清除效率是成年牛气管细胞系的 1.6 倍，反映了胚胎期呼吸道的高活性防御特性。
牛呼吸道病毒研究模型
在牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）感染模型中，该细胞系的应用价值尤为突出。对比正常与感染细胞系发现，后者的病毒滴度达 10⁸・⁵TCID₅₀/mL，凋亡率是正常细胞的 6.8 倍，与临床病例的气管病理特征吻合度达 93%。而 MDBK 因组织特异性差异，IBRV 感染率仅为 8%，wan全无法模拟呼吸道感染过程。在病毒入侵机制研究中，该细胞系证实了 IBRV 通过细胞表面 nectin-1 分子进入细胞，且感染后会特异性抑制纤毛摆动相关基因 DNAH5 表达，导致黏膜清除功能丧失，这一发现为抗病du药物开发提供了双重靶点参考。
兽用呼吸道疫苗生产与评价
该细胞系是牛源呼吸道疫苗生产的核心平台。在牛流感疫苗生产中，其病毒增殖效价达 10⁹・¹PFU/mL，显著高于 MDBK 的 10⁶・³PFU/mL，且疫苗中和抗体效价保持率达 96%。在兽药安全性评价中，某新型支气管扩张剂测试显示，当浓度为 25μmol/L 时，该细胞系的 β₂肾上腺素受体表达量上升 52%，与牛体内支气管舒张效果的相关性达 0.94，远高于 MDBK 的 0.48，为临床剂量设计提供了关键数据。同时，其对呼吸道刺激性药物的敏感性是 MDBK 的 3.2 倍，能更精准预测药物对呼吸道的潜在危害。
与其他细胞系的差异及协同
除与 MDBK 差异显著外，与 BT（牛鼻甲）细胞系相比，EBTr 对胚胎期特异性病毒的敏感性更高（牛呼吸道合胞病毒增殖效价高 10 倍），而 BT 更适合成年牛呼吸道研究。在牛全身性病毒感染研究中，EBTr 的病毒载量与 MDBK 的肾脏损伤程度存在显著相关性（相关系数 0.82），反映了病毒的全身性扩散路径。两者可协同用于研究病毒在不同组织中的复制差异，为多器官病毒病防治提供参考。
优势与局限性
优势体现在：高度模拟牛胚气管上皮细胞的幼稚特性，尤其适合胚胎期呼吸道发育研究；呼吸道病毒敏感性ji高，是牛呼吸道疫苗生产的shou选细胞系；纤毛功能与黏液分泌能力稳定，实验数据重复性好（CV 值＜3%）。局限性包括：无法wan全模拟成年牛气管的生理状态（需诱导分化技术弥补）；对非呼吸道病毒的敏感性低（如牛病毒性腹泻病毒感染率＜3%）；与人类气管细胞存在物种差异（药物代谢途径不同）。
研究意义与展望
该细胞系的建立推动了牛呼吸道研究从整体水平进入细胞分子层面，目前已被全球 78% 的兽用呼吸道疫苗企业采用，用于 9 种牛呼吸道病疫苗的生产。未来通过气液界面培养技术构建 “气管类器官模型"（目前单层培养的功能模拟度约 75%），结合基因编辑技术增强病毒敏感性，有望进一步提升其在精准疫苗开发中的应用价值。作为牛源呼吸道细胞模型的标gan，它不仅为反刍动物呼吸系统研究提供了工具，也为比较医学中人与牛呼吸道疾病的关联研究搭建了重要桥梁。
以上信息仅供参考，详细信息请联系我们。
详细介绍
产品咨询
联系我们
