vero IgRCD4-猴肾细胞系

产品型号：BY-1376

简要描述：

vero IgRCD4-猴肾细胞系，上皮样，贴壁生长，不表达 IgRCD4 受体，对 CD4 依赖型病毒敏感性低，适用于受体功能验证、病毒感染对照及相关机制研究。

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vero IgRCD4-猴肾细胞系

vero IgRCD4-猴肾细胞系，Vero IgRCD4⁻细胞系是 Vero IgCD4 细胞的基因编辑衍生株，通过靶向敲除 IgRCD4 融合受体基因获得，因不表达功能性 IgRCD4 受体，对 CD4 依赖型病毒（如 HIV、SIV）敏感性显著降低，成为病毒受体功能验证、感染机制对照研究及特异性实验验证的标准化阴性对照模型。其保留 Vero 细胞的上皮样特征与培养稳定性，同时因受体缺失的明确表型，为解析病毒 - 受体相互作用提供了精准对比工具。

一、细胞来源与基本特性

来源与构建机制：该细胞系源自 Vero IgCD4 细胞，利用 CRISPR/Cas9 技术靶向切割 IgRCD4 基因的 Fc 段编码区，经单细胞克隆筛选获得纯合敲除株（命名中 “⁻" 表示受体缺失）。测序验证显示 IgRCD4 基因存在 2bp 移码突变，导致受体表达wan全缺失（流式细胞术检测阳性率＜0.5%），全基因组测序证实除靶位点外，与 Vero IgCD4 遗传相似度＞99.9%，核型稳定（2n=60），传代 50 次无额外突变累积。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长时呈多角形，胞质均匀，细胞排列密度较 Vero IgCD4 更高；悬浮培养适应性差，以贴壁生长为主。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 28-32 小时，较 Vero IgCD4 缩短 5%-8%（因消除外源受体表达的代谢负荷），适应含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基，传代 60 次以上生长速率衰减＜10%，冻存复苏后存活率超 88%。

功能特征：核心特征是 IgRCD4 受体功能缺失：无法结合 HIV-1 gp120 蛋白（ELISA 结合实验显示亲和力较 Vero IgCD4 降低＞100 倍），HIV-1 感染后 48 小时病毒滴度＜10² TCID₅₀/mL（仅为 Vero IgCD4 的 0.01%），且无病毒复制支持能力（p24 抗原检测阴性）。同时，其保留 Vero 细胞固有的病毒复制 machinery，对非 CD4 依赖型病毒（如腺病毒）的敏感性与亲本 Vero 一致（滴度差异＜10%），确保仅特异性缺失 CD4 介导的感染途径。

二、核心应用领域

病毒受体功能验证

该细胞系是验证 IgRCD4 受体介导病毒感染的 “金标准" 对照。在 HIV 入侵机制研究中，对比 Vero IgCD4 与 Vero IgRCD4⁻的感染效率差异（前者滴度是后者的 10⁴倍），可直接证实 IgRCD4 受体的必要性；在共受体协同作用实验中，其可排除 CD4 非依赖途径的干扰，明确 CCR5/CXCR4 仅在 IgRCD4 存在时发挥辅助作用（敲除细胞中添加共受体激动剂不提升感染率）。此外，其可用于区分病毒的受体依赖型与非依赖型入侵路径，如验证猴免疫缺陷病毒（SIV）对 IgRCD4 的绝对依赖性（感染率降低 99.9%）。

抗病毒实验特异性对照

在药物筛选中，其可排除化合物的非特异性抗病毒效应。例如，评估某候选 Entry 抑制剂时，若该药物在 Vero IgCD4 中抑制率达 90%，而在 Vero IgRCD4⁻中无显著活性（抑制率＜5%），则证实其作用靶点为 IgRCD4 受体；反之，若在两种细胞中均有抑制活性，则提示存在非特异性细胞毒性（需进一步验证）。在中和抗体检测中，其可区分抗体是靶向病毒 gp120（仅在 Vero IgCD4 中起作用）还是非包膜蛋白（两种细胞中均起作用），提升实验特异性。

疫苗评价的阴性对照体系

在 HIV 疫苗免疫原性评估中，其作为阴性对照可排除血清中非特异性抑制因子的干扰。例如，疫苗免疫血清在 Vero IgCD4 中中和效价为 1:5120，而在 Vero IgRCD4⁻中无中和活性，证实中和作用依赖 IgRCD4- gp120 相互作用；若在两种细胞中均有中和效价，则提示存在非特异性细胞毒性抗体，需进一步纯化验证。该对照体系使疫苗评价的假阳性率降低 60% 以上。

三、培养方法

贴壁培养操作：

复苏：冻存管 37℃水浴 1 分钟解冻，转移至含 10mL 预热培养基（DMEM+10% 胎牛血清）的离心管，1000rpm 离心 5 分钟，重悬后接种至 T75 瓶，37℃、5% CO₂培养，24 小时贴壁率超 90%（无需筛选压力）。

换液：接种 48 小时后首ci换液，去除代谢废物，此后每 3 天换液一次，维持细胞密度在 3×10⁴-1×10⁵个 /cm²（密度过高易引发接触抑制）。

传代：融合度达 80% 时，弃培养基，PBS 清洗 2 次，加 2mL 细胞解离液，37℃孵育 2 分钟，镜检细胞脱落后加 8mL 培养基终止，按 1:5 比例传代，每 20 代通过流式检测确认 IgRCD4 阴性（阳性率需＜1%）。

病毒感染对照实验流程：

细胞准备：将 Vero IgCD4 与 Vero IgRCD4⁻细胞同步接种 24 孔板（1×10⁵个 / 孔），培养 24 小时至融合度 70%。

平行感染：均加入相同滴度的 HIV-1 病毒液（MOI=0.1），37℃吸附 2 小时，弃病毒液后加含 2% 血清的维持液。

对比检测：48 小时后同时检测两组细胞的病毒复制（p24 ELISA），计算感染效率差异倍数（通常＞1000 倍），验证受体依赖性。

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，冻存液（70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 8×10⁶个 /mL，分装冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮，保存期超 5 年，复苏后传代 1 次即可用于实验（无需筛选压力）。

四、优势与局限性

优势：IgRCD4 受体缺失彻di（阳性率＜0.5%），对照特异性强；与 Vero IgCD4 遗传背景高度一致（差异＜0.1%），排除遗传干扰；培养无需筛选药物，操作简便；对非 CD4 依赖型病毒敏感性正常，可同时作为多种实验的平行对照。

局限性：仅适用于 CD4 依赖型病毒研究，应用范围较窄；长期传代可能出现受体基因回复突变（虽概率＜0.1%，仍需定期检测）；无法模拟天然细胞的受体动态调控（需结合原代细胞验证）。

五、研究意义

Vero IgRCD4⁻细胞系的建立为病毒受体功能研究提供了精准对照工具，其与 Vero IgCD4 的 “正负对照对" 设计，彻di解决了传统实验中受体特异性验证困难的问题。在基础研究中，其助力阐明 IgRCD4 受体在病毒入侵中的核心作用，为解析受体 - 病毒相互作用的结构基础提供关键证据；在应用领域，其大幅提升抗病du药物与疫苗筛选的特异性，减少假阳性结果干扰，是确保实验结论可靠性的 “校准标尺"，为逆转录病毒研究的标准化提供了重要支撑。

以上信息仅供参考，详细信息请联系我们。

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