技术文章
TECHNICAL ARTICLES
详细介绍
来源与克隆筛选:该细胞系源自 1962 年分离的非洲绿猴肾原代细胞,经 Vero 细胞连续传代后,通过有限稀释法筛选获得第 6 株克隆(“E6" 代表克隆编号)。筛选过程未引入外源基因,主要基于病毒敏感性与生长稳定性指标,全基因组测序显示其染色体数目为 60(近二倍体),与 Vero 亲本细胞遗传相似度>99%,核型稳定性在传代 100 次内畸变率<2%。
形态与增殖:体外培养呈典型上皮样形态,贴壁生长时呈多角形,胞质均匀,细胞排列呈致密单层;悬浮培养易聚集成团(直径 50-100μm),故以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下,增殖周期约 28-32 小时,适应含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基,传代 80 次以上生长速率衰减<15%,冻存复苏后存活率超 88%,可在无血清培养基中实现驯化培养(需 6-8 周适应期)。
功能特征:核心优势在于病毒受体高表达与感染敏感性:ACE2 受体(血管紧张素转换酶 2)表达量较普通 Vero 细胞高 3 倍(流式细胞术检测),使冠状病毒(如 SARS-CoV、SARS-CoV-2)感染效率达 90% 以上;同时,其缺乏干扰素合成能力(IFN-α/β 分泌量<1pg/mL),病毒在胞内复制不受免疫抑制,滴度可达 10⁷-10⁸ TCID₅₀/mL,显著高于其他猴肾细胞系。
病毒分离与鉴定
疫苗生产与工艺开发
抗病du药物筛选
贴壁培养操作:ci
复苏:冻存管 37℃水浴 1 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(DMEM+10% 胎牛血清)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T75 瓶,37℃、5% CO₂培养,24 小时贴壁率超 90%。
换液:接种 48 小时后首ci换液,去除代谢废物,此后每 3 天换液一次,维持细胞密度在 3×10⁴-1×10⁵个 /cm²(密度过高降低病毒敏感性)。
传代:融合度达 80% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 细胞解离液,37℃孵育 2-3 分钟,镜检细胞脱落后加 8mL 培养基终止,按 1:3 比例传代,避免过度融合导致形态改变。
病毒培养流程:
接种准备:将细胞以 2×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,培养 24 小时至融合度 70%-80%,接种前用无血清培养基洗涤 2 次。
病毒感染:加入 100μL 系列稀释的病毒液,37℃吸附 1 小时,期间每 15 分钟轻摇一次,吸弃病毒液后加含 2% 血清的维持液。
观察与收获:每日观察 CPE,待 75% 细胞出现病变时收获上清,-80℃冻存,通过 TCID₅₀法测定病毒滴度。
冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,冻存液(70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重悬至 8×10⁶个 /mL,分装冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮,保存期超 5 年,复苏后传代 2 次再用于病毒实验(确保受体表达稳定)。
优势:对多种病毒(尤其冠状病毒)敏感性ji高;无内源性病毒与支原体污染,符合 GMP 标准;可适应无血清与大规模培养,便于工业化生产;病毒复制周期短(48-72 小时),实验效率高;遗传背景清晰,实验重复性好。
局限性:缺乏干扰素合成能力,可能高估药物体内抗病毒效果;部分非包膜病毒(如腺病毒)感染效率低;长期传代(>100 次)易出现受体表达下调(约 15%),需定期复苏早期冻存株。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
产品咨询
Copyright©2026 上海乾思生物科技有限公司 版权所有 备案号:沪ICP备2023041625号-7 sitemap.xml 技术支持:化工仪器网 管理登陆