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首页-产品系统-细胞-细胞系-BY-1374Vero E6非洲绿猴肾细胞系

Vero E6非洲绿猴肾细胞系
产品型号:BY-1374
简要描述:

Vero E6非洲绿猴肾细胞系,上皮样,贴壁生长,对多种病毒敏感(尤其冠状病毒),适用于病毒分离、疫苗生产及抗病du药物筛选。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

Vero E6非洲绿猴肾细胞系
Vero E6非洲绿猴肾细胞系,Vero E6 细胞系是 Vero 细胞家族的克隆衍生株,源自非洲绿猴肾上皮细胞,因对多种包膜病毒(尤其冠状病毒)敏感性ji高、无内源性病毒污染且易于规模化培养,成为病毒分离鉴定、疫苗生产及抗病du药物筛选的国际标准模型。其保留肾上皮细胞的天然特性,同时因 ACE2 受体高表达,为冠状病毒等病原体的体外研究提供了理想宿主环境。
一、细胞来源与基本特性
  • 来源与克隆筛选:该细胞系源自 1962 年分离的非洲绿猴肾原代细胞,经 Vero 细胞连续传代后,通过有限稀释法筛选获得第 6 株克隆(“E6" 代表克隆编号)。筛选过程未引入外源基因,主要基于病毒敏感性与生长稳定性指标,全基因组测序显示其染色体数目为 60(近二倍体),与 Vero 亲本细胞遗传相似度>99%,核型稳定性在传代 100 次内畸变率<2%。

  • 形态与增殖:体外培养呈典型上皮样形态,贴壁生长时呈多角形,胞质均匀,细胞排列呈致密单层;悬浮培养易聚集成团(直径 50-100μm),故以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下,增殖周期约 28-32 小时,适应含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基,传代 80 次以上生长速率衰减<15%,冻存复苏后存活率超 88%,可在无血清培养基中实现驯化培养(需 6-8 周适应期)。

  • 功能特征:核心优势在于病毒受体高表达与感染敏感性:ACE2 受体(血管紧张素转换酶 2)表达量较普通 Vero 细胞高 3 倍(流式细胞术检测),使冠状病毒(如 SARS-CoV、SARS-CoV-2)感染效率达 90% 以上;同时,其缺乏干扰素合成能力(IFN-α/β 分泌量<1pg/mL),病毒在胞内复制不受免疫抑制,滴度可达 10⁷-10⁸ TCID₅₀/mL,显著高于其他猴肾细胞系。

二、核心应用领域
  1. 病毒分离与鉴定

该细胞系是呼吸道病毒分离的 “金标准" 工具,尤其在冠状病毒研究中不可替代。SARS-CoV-2 样本接种后 48-72 小时可出现典型细胞病变(CPE),表现为细胞融合、脱落,通过 RT-PCR 验证分离效率达 95% 以上,较 Vero 细胞缩短 12-24 小时。在寨卡病毒与登革病毒分离中,其敏感性是 C6/36 细胞的 2 倍,可检测出临床样本中低至 10 TCID₅₀的病毒载量,为疫情早期预警提供关键诊断依据。
  1. 疫苗生产与工艺开发

因符合 WHO 生物制品生产标准,Vero E6 细胞广泛用于病毒疫苗制备。在脊髓灰质炎疫苗生产中,其可支持病毒高效复制,病毒滴度达 10⁹ PFU/mL,单批培养可生产 10 万剂疫苗;在新guan疫苗研发中,其作为灭活疫苗生产的宿主细胞,病毒培养周期仅 5-7 day,灭活后抗原纯度达 98% 以上,符合 EMA 与 NMPA 质量要求。其无血清驯化株可在 1000L 生物反应器中实现贴壁微载体培养,细胞密度达 5×10⁵个 /cm²,大幅提升疫苗产能。
  1. 抗病du药物筛选

该细胞系是评估抗病du药物活性的理想模型。在xin冠药物筛选中,通过 CPE 抑制法与病毒滴度测定,可快速量化药物 EC₅₀(如瑞德西韦 EC₅₀为 0.77μM),筛选准确率达 90% 以上;在抗流感药物测试中,其可区分神经氨酸酶抑制剂与融合抑制剂的作用差异,为药物机制研究提供可视化平台。基于其建立的高通量筛选体系,可日均检测 1000 种化合物,加速候选药物发现进程。
三、培养方法
  • 贴壁培养操作:ci

  1. 复苏:冻存管 37℃水浴 1 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(DMEM+10% 胎牛血清)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T75 瓶,37℃、5% CO₂培养,24 小时贴壁率超 90%。

  1. 换液:接种 48 小时后首ci换液,去除代谢废物,此后每 3 天换液一次,维持细胞密度在 3×10⁴-1×10⁵个 /cm²(密度过高降低病毒敏感性)。

  1. 传代:融合度达 80% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 细胞解离液,37℃孵育 2-3 分钟,镜检细胞脱落后加 8mL 培养基终止,按 1:3 比例传代,避免过度融合导致形态改变。

  • 病毒培养流程

  1. 接种准备:将细胞以 2×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,培养 24 小时至融合度 70%-80%,接种前用无血清培养基洗涤 2 次。

  1. 病毒感染:加入 100μL 系列稀释的病毒液,37℃吸附 1 小时,期间每 15 分钟轻摇一次,吸弃病毒液后加含 2% 血清的维持液。

  1. 观察与收获:每日观察 CPE,待 75% 细胞出现病变时收获上清,-80℃冻存,通过 TCID₅₀法测定病毒滴度。

  • 冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,冻存液(70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重悬至 8×10⁶个 /mL,分装冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮,保存期超 5 年,复苏后传代 2 次再用于病毒实验(确保受体表达稳定)。

四、优势与局限性
  • 优势:对多种病毒(尤其冠状病毒)敏感性ji高;无内源性病毒与支原体污染,符合 GMP 标准;可适应无血清与大规模培养,便于工业化生产;病毒复制周期短(48-72 小时),实验效率高;遗传背景清晰,实验重复性好。

  • 局限性:缺乏干扰素合成能力,可能高估药物体内抗病毒效果;部分非包膜病毒(如腺病毒)感染效率低;长期传代(>100 次)易出现受体表达下调(约 15%),需定期复苏早期冻存株。

五、研究意义
      Vero E6 细胞系的应用彻di改变了病毒学研究与疫苗开发的格局,其对冠状病毒的高敏感性使其成为 21 世纪多次疫     情(SARS、MERS、)应对中的关键工具。在基础研究中,其助力阐明病毒入侵机制(如 S 蛋白与 ACE2 的相互作 用);在公共卫生领域,其支撑了数十亿剂疫苗的生产,直接遏制了疫情传播,是连接基础病毒学研究与传染病防控的核心桥梁,彰显了细胞模型在*健康危机中的不可替代价值。

       以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

 

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