技术文章
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详细介绍
来源与形态:CHO 细胞最初分离自成年中国仓鼠的卵巢上皮组织,体外培养时呈上皮样形态,贴壁生长,细胞呈多边形或短梭形,排列紧密,边缘清晰。在 37℃、5% CO₂的培养环境中,增殖稳定,传代周期约 2-3 天,可适应贴壁培养、悬浮培养及无血清培养基体系,经驯化后能在生物反应器中实现高密度培养(细胞密度可达 1×10⁷个 /mL 以上)。
遗传特征:该细胞系为永生细胞系,核型呈非整倍体,染色体数目约 20-22 条,核型稳定且无内源性病毒序列。其基因组背景清晰,对外源基因的容纳能力强,转染后可通过抗性筛选获得稳定表达株。与原代细胞相比,CHO 细胞无接触抑制特性,可无限传代且保持生物学特性稳定,这一优势使其能满足长期实验与规模化生产需求。
重组蛋白药物生产
基因工程与功能研究
药物筛选与毒性评估
优势:遗传稳定性强,长期传代后仍保持外源蛋白的稳定表达;翻译后修饰能力优异,产物生物活性接近天然蛋白;培养适应性强,可在贴壁与悬浮体系中高效增殖,便于工业化生产;且无内源性病毒污染,生物安全性高,被 FDA、EMA 等国际监管机构认可为合规生产细胞系。
局限性:部分复杂蛋白(如多亚基膜蛋白)的表达量较低,需通过培养基优化或基因改造提升产量;悬浮培养时易形成细胞聚集体,增加下游纯化难度;与人类细胞的糖基化模式仍存在细微差异,可能影响部分药物的体内疗效。
培养条件:常规使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基,添加青mei素 - 链mei素抑制污染。生产阶段多采用化学成分明确的无血清培养基,减少批次差异与外源因子干扰。培养过程中需控制溶氧、pH 值等参数(pH 维持在 7.2-7.4),避免细胞密度过高(悬浮培养密度不超过 1×10⁷个 /mL)导致营养耗竭。
污染防控:贴壁细胞易受支原体污染,需定期通过 PCR 检测;冻存时使用含 10% DMSO 的冻存液,液氮保存可长期维持活性,复苏时 37℃快速解冻并离心去除 DMSO,降低细胞损伤。
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