LⅡ小鼠网织细胞肉瘤瘤株细胞系
LⅡ小鼠网织细胞肉瘤瘤株细胞系源自 615 近交系小鼠的自发性网织细胞肉瘤，是保留网织细胞恶性转化特征和淋巴造血组织浸润能力的恶性肿瘤模型，在网织细胞肉瘤的发病机制、免疫逃逸及抗肿瘤药物筛选研究中具有重要价值，为解析这种淋巴造血系统恶性肿瘤的生物学行为提供了理想工具。
该细胞系呈现典型的网织细胞肉瘤细胞形态与表型特征。显微镜下，细胞呈圆形或不规则形，以悬浮生长为主，部分细胞呈松散聚集状态，细胞体积较大（直径 15-25μm），核质比ji高，细胞核呈圆形或肾形，染色质呈疏松网状，可见 1-3 个明显核仁，核分裂象极为活跃（每 10 个高倍视野 15-20 个），胞质丰富，呈嗜碱性，可见伪足样突起，电镜下可见胞质内含有丰富的核糖体和少量粗面内质网，细胞表面有较多微绒毛，符合网织细胞的超微结构特点。免疫表型分析显示，细胞高表达网织细胞相关标志物 CD11b 和 Mac-1，流式细胞术检测阳性率分别达 90% 和 85%，同时表达单核巨噬细胞相关抗原 F4/80，阳性率达 75%，而 T、B 淋巴细胞标志物 CD3、CD19 呈阴性，证实其网织细胞来源特性。
体外培养体系中，LⅡ 细胞展现出旺盛的增殖能力与强侵袭潜能。最适培养条件为含 15% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基，添加 2mM 谷an酰胺，在 37℃、5% CO₂环境下，传代周期约 48 小时，对数生长期细胞活力达 95% 以上，倍增时间约 24 小时，显著快于正常网织细胞。其显著特点是体外侵袭能力ji强，Transwell 侵袭实验中 24 小时穿透基质胶的细胞数是正常网织细胞的 8 倍，这种侵袭能力与其高表达基质金属蛋白酶 - 12（MMP-12）密切相关，酶谱分析显示其活性较正常网织细胞高 6 倍，可高效降解淋巴组织的基质成分。软琼脂克隆形成率达 40%，克隆形态呈圆形或不规则形，边缘模糊，反映其高度恶性的克隆形成能力。冻存复苏性能优异，液氮冻存后复苏存活率超 90%，连续传代 50 次后，CD11b 表达及侵袭能力无明显衰减，保证实验的稳定性与可重复性。
LⅡ 细胞的核心价值体现在其对网织细胞肉瘤浸润淋巴造血组织过程的精准模拟。在动物模型中，将 1×10⁶个细胞尾静脉注射 615 小鼠，7 天即可在脾脏和淋巴结中检测到肿瘤细胞，14 天脾脏和淋巴结明显肿大（重量分别增加 4 倍和 3 倍），21 天骨髓浸润率达 100%，病理切片显示脾脏红髓和白髓结构被肿瘤细胞破坏，淋巴结滤泡消失，骨髓造血组织被大量肿瘤细胞取代，与人类网织细胞肉瘤的淋巴造血组织浸润模式高度一致。通过荧光标记追踪发现，肿瘤细胞首先定植于脾脏红髓血窦和淋巴结边缘窦，通过高表达 L - 选择素与淋巴组织血管内皮细胞结合，进而浸润淋巴实质，这种浸润路径依赖 CCR5-CCL5 趋化轴，CCR5 拮抗剂处理可使脾脏和淋巴结浸润率下降 60%。
在发病机制研究中，该细胞系揭示了网织细胞肉瘤te有的分子异常。基因测序显示，细胞存在 NRAS 基因第 61 密码子突变，导致 RAS/RAF/MEK 通路持续激活，Western blot 检测显示磷酸化 MEK（p-MEK）和磷酸化 ERK（p-ERK）表达量较正常网织细胞高 8 倍和 10 倍，使用 MEK 抑制剂处理后，细胞增殖率下降 65%，凋亡率上升 40%，证实 NRAS 突变是其恶性增殖的重要驱动因素。此外，细胞中 NF-κB 信号通路异常激活，p65 亚基核转位增加，可结合至 IL-6 启动子区域，促进细胞因子分泌，NF-κB 抑制剂处理可使细胞 G1 期比例增加 35%。
在转移机制研究中，LⅡ 细胞展现出广泛的淋巴造血组织转移特性。动物实验显示，除脾脏、淋巴结和骨髓外，肝脏和肺脏也可出现转移灶，30 天肝转移率达 50%，肺转移率达 35%，这种多器官转移特性与细胞高表达黏附分子 CD44v6 相关，该分子可与多种组织中的透明质酸结合，流式细胞术检测显示其与肝窦内皮细胞的黏附率达 45%，CD44v6 抗体处理可使肝转移率下降 55%。体外迁移实验显示，细胞对不同组织来源的趋化因子均有较强反应，迁移能力是其他肉瘤细胞系的 2 倍，这种广泛迁移能力与其高表达多种趋化因子受体相关。
在药物筛选应用中，LⅡ 细胞是评估网织细胞肉瘤治疗药物的有效工具。体外药敏实验显示，细胞对蒽环类药物敏感，阿mei素的 IC50 约 0.2μM，药物处理后细胞周期停滞于 G2/M 期，凋亡相关蛋白 Caspase-3 活性上调 5 倍。联合用药实验证实，阿mei素与 MEK 抑制剂联用可使杀伤率提升至 85%，较单药治疗提高 35%，且对正常网织细胞毒性更低（IC50 提高 2.5 倍）。体内实验中，阿mei素腹腔注射可使 615 小鼠脾脏重量减少 60%，外周血肿瘤细胞比例从 60% 降至 20%，证实其体内抗网织细胞肉瘤活性。
在免疫逃逸机制研究中，LⅡ 细胞通过多种方式逃避宿主免疫攻击。细胞表面高表达 PD-L1，较正常网织细胞高 5 倍，可与 T 细胞表面 PD-1 结合抑制免疫应答，PD-L1 抗体处理可使肿瘤细胞对细胞毒性 T 细胞的敏感性提高 40%。同时，细胞分泌大量 IL-10，可诱导调节性 T 细胞（Treg）分化，使肿瘤微环境中 Treg 比例增加 3 倍，IL-10 中和抗体可增强免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。
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