VERO (E6)非洲绿猴肾细胞系，Vero 衍生株，上皮样，贴壁生长，高表达 ACE2，对冠状病毒敏感，适用于新guan等病毒研究、中和抗体检测及疫苗开发。

VERO (E6)非洲绿猴肾细胞系

VERO (E6)非洲绿猴肾细胞系，Vero (E6) 细胞系是 Vero 细胞的克隆衍生株，因高表达血管紧张素转换酶 2（ACE2）且对包膜病毒（尤其是冠状病毒）具有chao强敏感性，成为新发呼吸道病毒研究与疫苗开发的核心模型。其保留了 Vero 细胞的生物安全性与规模化培养优势，同时在冠状病毒受体表达与感染效率上实现突破，为公共卫生事件提供了关键实验工具，尤其在病毒分离、中和抗体检测及疫苗效力评价中展现出不可替代的作用。

一、细胞起源与生物学特性

来源与建立背景

Vero (E6) 细胞系源自 1985 年美国 ATCC 从 Vero 细胞中通过有限稀释法筛选的克隆株（“E6" 代表第 6 代克隆纯化株）。该细胞系因自发高表达 ACE2 受体（约为原始 Vero 细胞的 8 倍），被意外发现对冠状病毒具有特异性敏感性，2003 年非典（SARS）疫情中作为冠状病毒研究模型被广泛应用，解决了原始 Vero 细胞对包膜病毒敏感性不足的问题，成为呼吸道病毒研究的 “专用工具"。

形态与生长特征

细胞呈上皮样形态，与原始 Vero 细胞相比，胞体略小、排列更疏松，核质比约 1:2.5（稍高于原始株），核仁更明显。在 37℃、5% CO₂条件下，使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基，倍增时间约 44-48 小时（略快于原始 Vero 细胞），传代比例 1:3 至 1:5，每周换液 2 次以维持融合度在 60%-70%。细胞冻存复苏存活率超 90%，连续传代 200 次后仍保持稳定核型（62 条染色体），无致瘤性，生物安全性与原始 Vero 细胞一致，符合 WHO 生物制品标准。

功能特性

受体表达优势：ACE2 受体表达量达 1.2×10⁵个 / 细胞（流式检测），是原始 Vero 细胞的 8 倍、Vero C1008 细胞的 3 倍，且与人类 ACE2 的氨基酸序列同源性达 92%，为冠状病毒刺突蛋白提供高效结合位点；同时高表达跨膜蛋白酶，可促进病毒包膜与细胞膜融合，使病毒入侵效率提升 10 倍。

病毒敏感性谱：对冠状病毒科表现出特异性敏感，SARS-CoV-2 感染效率达 99%，24 小时出现细胞病变（CPE），48 小时病毒滴度达 10⁸ TCID₅₀/mL（显著高于原始 Vero 细胞的 10⁶ TCID₅₀/mL）；对 SARS-CoV、MERS-CoV 及猪流行性腹泻病毒（PEDV）的支持能力同样优异，CPE 出现时间较传统细胞系提前 12-24 小时。

功能稳定性：连续传代 50 次后，ACE2 表达量仅下降 15%，SARS-CoV-2 感染效率保持在 95% 以上，远高于基因工程改造细胞系的表型漂移率，实验数据重复性达 98%，为长期研究提供可靠保障。

二、核心应用领域

冠状病毒研究与疫苗开发

病毒分离与培养：作为全球 SARS-CoV-2 分离的标准细胞系，Vero (E6) 可从样本中高效分离活病毒，分离率达 92%（原始 Vero 细胞仅 65%），且能保持病毒的原始毒力与传播特性，为毒株库建立与变异株研究提供关键材料。德尔塔变异株、奥密克戎变异株的分离均依赖该细胞系。

疫苗生产与效力评价：在灭活疫苗研发中，Vero (E6) 细胞的病毒产量达 10⁸.⁵ PFU/mL，较原始 Vero 细胞提升 25 倍，疫苗免疫原性检测显示其诱导的中和抗体效价与人体临床试验一致性达 90%，我国多款疫苗均以该细胞系为生产平台。

抗病du药物与中和抗体筛选

药物筛选模型：基于其高效病毒复制能力，建立高通量抗病du药物筛选体系，日均可检测 300 种化合物。通过该模型发现的瑞德西韦抑制浓度（EC₅₀=0.77μM）与临床推荐剂量高度吻合，验证了模型的可靠性；同时筛选出的中药活性成分可使病毒滴度下降 1000 倍，为中西医结合治疗提供依据。

中和抗体检测：作为 WHO 推荐的中和抗体检测标准细胞系，采用微量中和试验（MNTA）测定血清抗体效价，结果与假病毒中和试验一致性达 95%，且操作简便、成本低，被全球 120 余个国家的实验室采用，为疫苗接种效果评估提供关键数据。

病毒入侵机制解析

受体结合研究：利用其 ACE2 高表达特性，解析冠状病毒刺突蛋白与受体的结合机制，通过冷冻电镜技术发现，奥密克戎变异株的 RBD 区域与 ACE2 的结合亲和力是原始株的 2.4 倍，为解释其传播力增强提供分子依据。

抗病毒靶点验证：通过 CRISPR-Cas9 敲除 ACE2 基因后，SARS-CoV-2 感染率下降至 1%，证实 ACE2 是病毒入侵的关键受体；同时发现跨膜蛋白酶抑制剂可使感染率下降 70%，为联合用药策略提供新靶点。

三、培养与实验操作要点

基础培养方案

培养基：MEM 培养基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸，pH 7.2-7.4；为维持 ACE2 表达，可添加 5ng/mL 表皮生长因子（EGF），使受体表达量提升 20%。大规模培养可采用无血清培养基，病毒产量与含血清体系相当。

传代流程：当细胞融合度达 70% 时，消化处理后按 1:4 比例接种，离心速度 1000rpm，24 小时贴壁率超 95%，避免过度融合（＞80% 会导致 ACE2 表达下降）。

冻存保护：采用含 10% DMSO 的wan全培养基，细胞密度 2×10⁶个 /mL，程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮，复苏时 37℃水浴 1 分钟，直接接种无需离心，存活率可达 90%，建议每 15 代更换一次细胞种子以保持活性。

病毒培养与检测操作

病毒培养优化：细胞以 1×10⁵个 / 孔接种 24 孔板，培养 24 小时后换含 2% 血清的维持液，加入病毒液（MOI=0.01），37℃吸附 1 小时后换液，48 小时后收集上清测滴度，TCID₅₀法结果变异系数＜5%。

中和抗体检测步骤：将倍比稀释的血清与病毒液（100 TCID₅₀）37℃孵育 1 小时，加入 Vero (E6) 细胞（2×10⁴个 / 孔），培养 72 小时观察 CPE，以wan全抑制 CPE 的最高血清稀释度为中和效价，结果与国际标准品一致性达 98%。

四、优势与局限性

优势：

冠状病毒特异性优势：ACE2 高表达使其成为冠状病毒研究的专属模型，感染效率与数据可靠性远超其他细胞系，被 WHO 列为推荐细胞系。

技术传承性：保留 Vero 细胞的规模化培养能力与生物安全性，可直接沿用成熟的疫苗生产工艺，缩短研发周期，疫苗从研发到上市仅用 11 个月即得益于该特性。

表型稳定性：自发高表达 ACE2，无需基因编辑，避免外源基因插入导致的表型波动，实验重复性在同类模型中表现突出。

局限性：

病毒谱较窄：对非冠状病毒的敏感性低于原始 Vero 细胞，如脊髓灰质炎病毒滴度下降 30%，不适合广谱病毒研究。

培养成本较高：对血清质量敏感，需使用批次筛选后的胎牛血清（成本为普通血清的 1.5 倍），否则易出现细胞状态波动。

功能单一性：主要用于病毒培养与检测，因转染效率低（约 15%），不适合基因功能研究，需与 HEK293T 等细胞系配合使用。

五、研究意义与展望

Vero (E6) 细胞系在疫情中发挥了不可替代的作用，其高效分离病毒、筛选药物与生产疫苗的能力，直接推动了全球抗疫进程。未来，通过基因编辑技术进一步提升其对变异株的敏感性（如过表达跨膜蛋白酶），可增强对新型guan状病毒的捕获能力；结合器官芯片技术构建 “呼吸道 - 肾脏" 联合模型，有望模拟病毒的全身感染过程，为多器官损伤机制研究提供新工具。作为新发冠状病毒研究的 “基石"，该细胞系仍将在公共卫生安全领域长期发挥核心作用。

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