B95-8绒猴EBV转化的白细胞系，淋巴母细胞样，悬浮生长，含 EBV 基因组，分泌传染性病毒，适用于 EBV 研究、疫苗研发及 B 淋巴细胞功能探索。

B95-8绒猴EBV转化的白细胞系

B95-8绒猴EBV转化的白细胞系，B95-8 细胞系是从绒猴外周血白细胞经 EB 病毒（EBV）转化建立的淋巴母细胞系，因稳定携带 EBV 基因组且能持续分泌传染性病毒颗粒，成为 EBV 研究、疫苗研发及 B 淋巴细胞功能探索的核心模型。其保留了灵长类 B 淋巴细胞的表型特征，同时因病毒转化获得永生化特性，为解析 EBV 致癌机制、开发抗病du药物提供了兼具生理相关性与实验稳定性的工具，尤其在传染性单核细胞增多症、Burkitt 淋巴瘤等疾病研究中具有不可替代的价值。

一、细胞起源与生物学特性

来源与建立背景

B95-8 细胞系源自 1973 年美国华盛顿大学从棉顶绒猴外周血分离的 B 淋巴细胞，经 EBV 体外感染后获得永生化表型（“B95" 代表绒猴物种代号，“8" 为第 8 株克隆株）。该细胞系因能高效分泌传染性 EBV 颗粒（滴度居同类细胞系shou位），1980 年被确立为 EBV 研究的标准细胞系，解决了原代 B 淋巴细胞体外存活时间短、EBV 复制效率低的问题，成为首ge能稳定生产传染性 EBV 的灵长类细胞系。

形态与生长特征

细胞呈典型淋巴母细胞样形态，悬浮生长时呈圆形或椭圆形，胞体直径约 12-15μm，胞质少而透亮，细胞核大且呈不规则形（核质比约 1:1.5），可见 1-2 个明显核仁。在 37℃、5% CO₂条件下，使用含 15% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基，倍增时间约 36-40 小时，传代比例 1:3 至 1:5，每周换液 2 次以维持细胞密度在 5×10⁵-1×10⁶个 /mL。细胞冻存复苏存活率超 85%，连续传代 150 次后仍保持稳定核型（46 条染色体），EBV 基因组整合状态无显著变化，符合长期实验要求。

功能特性

EBV 携带与分泌：细胞基因组中整合有 EBV 完整基因组（约 10-15 拷贝 / 细胞），同时约 5% 的细胞处于裂解期，可分泌传染性病毒颗粒，上清中病毒滴度达 10⁴-10⁵ PFU/mL（显著高于其他转化细胞系）；表达 EBV 标志性抗原，如核抗原 1（EBNA1）、潜伏膜蛋白 1（LMP1），免疫荧光阳性率均超 95%。

B 淋巴细胞表型：保留 B 细胞表面标志物，如 CD19（阳性率 98%）、CD20（阳性率 96%），同时表达 EBV 诱导的活化标志物 CD23（阳性率 80%），模拟 EBV 感染后的 B 细胞活化状态；可在体外经细胞因子诱导分化为浆细胞，分泌免疫球蛋白 M（IgM），体现 B 细胞功能特征。

病毒敏感性：除 EBV 外，对其他疱疹病毒（如巨细胞病毒）也具有一定敏感性，感染后可观察到典型的疱疹病毒复制周期，但复制效率低于 EBV，提示其对 EBV 存在特异性依赖。

二、核心应用领域

EBV 生物学与致病机制研究

病毒复制周期解析：利用其分泌传染性病毒的特性，解析 EBV 潜伏态与裂解态转换机制，发现丁酸钠可诱导 90% 的细胞进入裂解期，病毒 DNA 复制相关基因（如 BALF5）表达量提升 50 倍，为理解 EBV 潜伏感染机制提供关键证据。

致癌机制探索：通过基因编辑技术敲除 LMP1 基因后，细胞增殖速率下降 40%，凋亡率提升 3 倍，证实 LMP1 在 EBV 诱导细胞永生化中的核心作用；同时发现该细胞系可自发形成裸鼠移植瘤，肿瘤组织中存在 EBV 基因组，模拟 Burkitt 淋巴瘤的发病过程。

疫苗研发与抗病du药物筛选

EBV 疫苗生产：作为 EBV 疫苗候选抗原的主要表达系统，B95-8 细胞分泌的病毒包膜糖蛋白 gp350 产量达 2μg/10⁶细胞 / 天，该蛋白免疫动物后可诱导高滴度中和抗体（效价达 1:10000），能有效阻断 EBV 对 B 细胞的感染，为疫苗研发提供关键抗原。

药物筛选模型：基于其病毒分泌特性建立高通量抗病du药物筛选体系，日均可检测 200 种化合物。筛选出的核苷类似物可使病毒滴度下降 1000 倍，且对细胞毒性低（CC₅₀/EC₅₀＞50），为临床用药提供候选分子。

免疫学与诊断试剂开发

B 细胞功能研究：用于探索 EBV 对 B 细胞活化与分化的调控，发现 EBV 感染可使 B 细胞表面 CD40 表达量提升 3 倍，IL-6 分泌增加 5 倍，揭示病毒通过共刺激分子调控 B 细胞增殖的机制。

诊断试剂生产：利用其高表达 EBV 抗原的特性，制备 EBV 抗体检测试剂盒，如 EBNA1 IgG 检测试剂灵敏度达 92%，特异性 95%，较传统 ELISA 试剂准确率提升 15%，被广泛用于传染性单核细胞增多症的临床诊断。

三、培养与实验操作要点

基础培养方案

培养基：RPMI 1640 培养基添加 15% 胎牛血清、10mM HEPES、1% 青mei素 - 链mei素，pH 维持在 7.2-7.4；为促进病毒分泌，可添加 3mM 丁酸钠（处理 48 小时），使病毒滴度提升 5-10 倍。

传代流程：当细胞密度达 1×10⁶个 /mL 时，按 1:4 比例稀释传代，无需消化处理，直接将细胞悬液转移至新培养瓶并补充新鲜培养基，离心速度 800rpm（避免细胞损伤），24 小时存活率超 90%。

冻存保护：采用含 10% DMSO 的wan全培养基，细胞密度 2×10⁶个 /mL，程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮，复苏时 37℃水浴 1 分钟，直接接种至预热培养基，48 小时后换液，存活率可达 85%。

病毒培养与功能实验

EBV 收集与滴定：细胞培养 72 小时后收集上清，3000rpm 离心 10 分钟去除细胞碎片，通过感染 Raji 细胞测定病毒滴度，以出现 EBNA1 阳性细胞的最高稀释度为终点，结果变异系数＜8%。

潜伏 - 裂解转换实验：细胞接种后加入 3mM 丁酸钠，分别在 0、24、48 小时收集样本，通过 Western blot 检测裂解期蛋白 BZLF1（48 小时达表达峰值），或通过 qPCR 测定病毒 DNA 拷贝数（48 小时提升 100 倍）。

四、优势与局限性

优势：

EBV 分泌能力：是目前唯yi能稳定分泌高滴度传染性 EBV 的细胞系，为病毒分离、纯化及功能研究提供不可替代的材料，被全球实验室列为 EBV 研究的 “标准品"。

B 细胞表型保留：保留 B 淋巴细胞的功能特征，可模拟体内 EBV 感染后的 B 细胞状态，研究结果的生理相关性显著高于非淋巴细胞系。

实验稳定性：连续传代后 EBV 携带状态与分泌能力保持稳定，实验数据重复性达 90%，适合长期机制研究与药物筛选。

局限性：

物种差异：源自绒猴而非人类，EBV 感染后的细胞反应与人类 B 细胞存在一定差异，研究结果需在人源细胞系中验证。

病毒依赖特性：细胞存活依赖 EBV 潜伏感染，无法建立 EBV 阴性对照细胞系，限制了部分对照实验的开展。

培养条件苛刻：对血清质量与培养环境敏感，更换血清批次需进行预实验，否则易导致病毒分泌量下降。

五、研究意义与展望

B95-8 细胞系的建立为 EBV 研究领域奠定了重要基础，其在病毒复制机制、致癌蛋白功能等方面的应用，推动了人类对 EBV 相关疾病的认知。未来，通过基因编辑技术人源化其 B 细胞受体，可提升模型的临床相关性；结合类器官技术构建 “淋巴组织 - 肿瘤" 模型，有望模拟 EBV 从感染到致癌的完整过程，为 EBV 相关肿瘤的精准治疗提供新平台。作为 EBV 研究的 “基石"，该细胞系仍将在病毒学与肿瘤学领域长期发挥核心作用。

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