PK15-cyclinA shRNA1猪肾上皮细胞系，PK15-cyclinA shRNA1 为 PK15 衍生细胞系，稳定沉默 cyclinA（第 1 条 shRNA），上皮样贴壁生长，增殖受抑，适用于细胞周期调控、病毒复制关联研究及相关药物筛选。

细胞周期阻滞特征：流式细胞术显示，G₂/M 期细胞比例达 30%（母系 15%，shRNA2 为 45%），S 期比例降至 20%（母系 30%，shRNA2 为 10%），呈现中度 G₂/M 期阻滞；cyclinB1 表达量代偿性提升 25%（低于 shRNA2 的 40%），p21 等蛋白无显著变化，证实阻滞程度与 cyclinA 表达量正相关。

增殖相关功能变化：Ki-67 阳性率降至 45%（母系 80%，shRNA2 为 25%），DNA 合成速率下降 40%（³H-TdR 掺入法，介于母系与 shRNA2 之间）；上皮标志物 CK18 阳性率保持 96% 以上，确保上皮功能完整性。

病毒受体保留情况：猪细小病毒受体整合素 αvβ3（阳性率 93%）、猪圆环病毒受体硫酸乙酰肝素（阳性率 91%）表达量与母系及 shRNA2 相当，为病毒感染的平行对比研究提供一致背景。

cyclinA 功能梯度解析：通过与 shRNA2 对比，证实 cyclinA 表达量与 G₂/M 期阻滞程度呈线性相关（R²=0.92），且当 cyclinA 下降 50% 时，CDC25C 磷酸化水平下降 30%（shRNA2 为 50%），纺锤体异常率达 20%（shRNA2 为 35%），揭示 cyclinA 的剂量依赖性功能。

周期转换动力学研究：采用活细胞成像技术，发现该细胞系的 G₂期时长较母系延长 6 小时（shRNA2 延长 12 小时），证实 cyclinA 表达量与细胞周期进程呈负相关，为解析周期调控的精细机制提供量化数据。

DNA 病毒敏感性差异：猪细小病毒在该细胞系中复制效率下降 35%（病毒滴度从母系的 10⁸ TCID₅₀/mL 降至 10⁷.⁶ TCID₅₀/mL，shRNA2 下降 60%），NS1 表达量下降 30%（shRNA2 为 50%），证实该病毒复制对 cyclinA 存在剂量依赖性需求，且存在 50% 的功能阈值。

病毒适应机制对比：猪圆环病毒 2 型在该细胞系中复制效率下降 8%（shRNA2 下降 15%），其 Cap 蛋白与 cyclinB1 的结合能力较在 shRNA2 中弱 20%，揭示病毒代偿机制的效率与 cyclinA 下调程度相关。

细胞周期药物剂量筛选：建立基于梯度阻滞表型的筛选体系，发现某 cyclinA 抑制剂在 2μM 时可模拟该细胞系表型（G₂/M 期 32%），5μM 时接近 shRNA2 表型，为药物剂量优化提供参考。

抗病du药物的效能分级：利用该细胞系与 shRNA2 的梯度模型，发现某核苷类似物对猪细小病毒的抑制效果随 cyclinA 下调程度增强而提升（EC₅₀在母系中 1.2μM，该细胞系 0.8μM，shRNA2 中 0.4μM），证实药物与细胞周期的协同作用。

培养基：同 shRNA2，采用含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基，避免 EGF 等促增殖因子；为维持梯度表型，需与母系、shRNA2 同步培养，确保实验条件一致。

传代流程：当细胞融合度达 65% 时，按 1:3 比例接种（介于母系 1:3-1:5 与 shRNA2 1:2 之间），离心速度 1000rpm，24 小时贴壁率超 92%，避免融合度＞75%（凋亡率较 shRNA2 低 5%）。

冻存保护：同 shRNA2，细胞密度 3×10⁶个 /mL，复苏存活率达 88%，需与 shRNA2 同时冻存以保证批次一致性。

细胞周期检测：流式细胞术分析时，需同时设置母系与 shRNA2 对照，G₂/M 期比例变异系数＜6%；PH3 阳性率达 25%（母系 10%，shRNA2 40%），适合量化分析。

病毒感染实验：接种猪细小病毒（MOI=0.1）后 72 小时，病毒滴度检测需采用三联对照（母系、该细胞系、shRNA2），以明确 cyclinA 依赖程度。

优势：

局限性：