RCFBF兔角膜前基质层成纤维细胞系为贴壁生长的成纤维样细胞系，高表达波形蛋白，具前基质胶原合成能力，适用于角膜前基质瘢痕、圆锥角膜及相关修复药物研究。

前基质特异性标志物表达：高表达波形蛋白（Vimentin，98% 阳性）、I 型胶原（Col1A1，97% 阳性）及角膜蛋白 KERA（96% 阳性），其中 Col1A1 表达量是 RCBBF 细胞的 1.8 倍（RCBBF 细胞以 VI 型胶原为主）；与 RCBBF 细胞的后基质调控因子不同，其前基质调控因子 SPARC 与 BMP4 的表达量分别是兔后基质细胞的 6.2 倍和 5.8 倍，体现角膜前基质成纤维细胞的谱系特异性。

胶原合成与网格构建能力：基础状态下 I 型胶原分泌量达 180μg/mg 蛋白（是 RCBBF 细胞的 2.3 倍），I 型与 III 型胶原比值为 8:1（与正常角膜前基质组成一致）；分泌的胶原纤维形成正交网格结构（通过扫描电镜观察），网格孔径均一（5-8μm），与 RCBBF 细胞的平行层状胶原排列形成鲜明对比。

创伤响应特性：对创伤相关细胞因子 TGF-β2 高度敏感，5ng/mL 处理 48 小时后，细胞增殖率提升 2.1 倍，α-SMA 表达量增加 5.3 倍，符合前基质瘢痕形成的典型特征；该响应依赖 Smad2/3 与 AP-1 通路协同激活（磷酸化水平分别提升 4.2 倍和 3.6 倍），而 RCBBF 细胞因 TGF-β2 受体表达量低，同等处理后增殖率仅提升 1.3 倍。

网格形成调控：利用 RCFBF 细胞发现，SPARC 可通过结合 I 型胶原（解离常数 1.7×10⁻⁸M）促进胶原纤维侧向聚集，敲除 SPARC 后网格孔径变异度增加 4 倍（从 12% 升至 48%）（RCBBF 细胞因 SPARC 低表达无法开展此类研究），证实其在网格结构维持中的核心作用。

力学信号响应：通过不同刚度基质培养实验显示，RCFBF 细胞在刚度 10kPa 基质上的胶原网格排列有序度是 5kPa 基质的 2.2 倍，同时 BMP4 表达量提升 3.1 倍；阻断整合素 β1 后，力学诱导的有序排列消失（有序度下降 70%），揭示前基质胶原排列的力学调控机制。

角膜前基质瘢痕模型：用 TGF-β2 联合 IL-6 处理 RCFBF 细胞 72 小时，构建前基质瘢痕模型，I 型胶原分泌量提升 2.4 倍，网格结构破坏率达 65%，伴随纤维化相关基因CTGF表达增加 7.2 倍；RNA 测序显示，175 个瘢痕相关基因上调（如MMP14提升 9.3 倍），其中 TGF-β/Smad 与 PI3K/Akt 通路交叉激活是关键（联合抑制后瘢痕表型下降 70%）。

圆锥角膜模型：通过沉默 DCN 基因（编码核心蛋白聚糖），RCFBF 细胞出现圆锥角膜样表型 —— 胶原纤维抗张力强度下降 50%，基质金属蛋白酶活性提升 3.8 倍；该模型对 RGD 肽治疗的响应与临床一致（抗张力强度恢复 35%），RCBBF 细胞因 DCN 表达模式不同无法模拟。

抗瘢痕药物筛选：建立基于 RCFBF 细胞的高通量筛选模型，对 130 种化合物进行评估，发现某香dou素类化合物可特异性抑制 TGF-β2 诱导的 α-SMA 表达（IC₅₀=1.9μM），同时上调 SPARC 表达（提升 3.5 倍）；该化合物在兔角膜前基质损伤模型中可使瘢痕面积减少 55%，网格结构恢复率达 45%，优于阳性药 5 - 氟尿mi啶（38%）。

圆锥角膜治疗药物评估：利用 RCFBF 细胞的圆锥角膜模型，发现某硫酸软gu素衍生物可使 DCN 沉默细胞的胶原抗张力强度恢复 40%，MMP 活性下降 55%；在体实验中，该化合物可延缓兔圆锥角膜模型的角膜曲率增加（延缓率 42%），且无明显炎症反应。

优势：

局限性：