BNL.1ME A.7R.1小鼠肝瘤株细胞系
BNL.1ME A.7R.1小鼠肝瘤株细胞系源自 BALB/c 小鼠的诱发性肝细胞癌，是保留肝细胞恶性转化特征和肝内高转移潜能的经典肝脏肿瘤模型，在肝细胞癌的肝内侵袭机制、门静脉转移规律及肝靶向药物筛选研究中具有重要价值，为解析这种原发于肝脏的恶性肿瘤的du特生物学行为提供了理想工具。
该细胞系呈现典型的肝细胞癌细胞形态与表型特征。显微镜下，细胞呈多边形，以贴壁生长为主，排列呈不规则条索状或巢状，模拟正常肝细胞的排列方式。细胞核呈圆形或椭圆形，核质比高，染色质呈粗颗粒状，可见 1-2 个明显核仁，核分裂象每 10 个高倍视野 6-8 个，胞质丰富，呈嗜酸性，部分细胞胞质内可见脂肪空泡和嗜酸性颗粒（类似肝细胞的代谢特征）。电镜下可见胞质内含有丰富的线粒体和粗面内质网，细胞膜上有微绒毛结构，符合肝细胞的超微结构特点。免疫表型分析显示，细胞高表达肝细胞特异性标志物甲胎蛋白（AFP）和白蛋白（ALB），流式细胞术检测阳性率分别达 85% 和 80%，同时表达肝细胞癌相关抗原 Hep Par 1（阳性率 75%），而胆管细胞标志物 CK19 表达阴性，证实其肝细胞来源特性。
体外培养体系中，BNL.1ME A.7R.1 细胞展现出稳定的增殖能力与强肝内侵袭潜能。最适培养条件为含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基，添加 1% 非必需氨基酸和 10μg/mL 胰岛素，在 37℃、5% CO₂环境下，传代周期约 72 小时，对数生长期细胞活力达 90% 以上，倍增时间约 50 小时。其显著特点是体外可形成类似肝板的细胞排列，相邻细胞间形成胆小管样结构，这种特性与其高表达细胞间连接蛋白紧密连接蛋白 - 1（ZO-1）相关（表达量较其他肝癌细胞系高 25%）。Transwell 侵袭实验显示，其穿透肝窦内皮细胞单层的能力是其他肝癌细胞系的 1.8 倍，这种肝内定向侵袭性依赖于高表达的基质金属蛋白酶 - 9（MMP-9），酶活性较其他肝癌细胞高 3 倍，可高效降解肝窦基底膜的 Ⅳ 型胶原。软琼脂克隆形成率达 40%，克隆形态呈圆形或不规则形，边缘清晰，连续传代 50 次后，AFP 表达及肝内侵袭能力无明显衰减，冻存复苏存活率超 85%。
在动物模型中，BNL.1ME A.7R.1 细胞的成瘤与转移模式ji具特点。将 1×10⁶个细胞肝内接种 BALB/c 小鼠，7 天形成局部肿瘤，14 天出现门静脉癌栓（发生率 70%），21 天肝内转移灶数量达 15-20 个 / 肝脏，模拟人类肝细胞癌的肝内转移偏好。病理切片显示原发瘤呈结节状生长，肝内转移灶沿门静脉分支分布，破坏肝小叶结构，免疫组化可见 AFP 阳性细胞在肝内弥漫浸润。荧光标记追踪证实，肿瘤细胞通过门静脉系统播散并定植于肝内，高表达门静脉内皮细胞黏附分子 CD146，黏附率达 60%，CD146 抗体处理可使肝内转移率下降 65%。
发病机制研究揭示其te有的分子异常。基因测序显示，细胞存在 β-catenin 基因第 3 外显子突变（S45F）和 p53 基因缺失，导致 Wnt/β-catenin 通路持续激活，Western blot 检测显示核内 β-catenin 表达量较正常肝细胞高 8 倍，下游靶基因 Cyclin D1 和 c-Myc 表达上调 5 倍和 6 倍，使用 Wnt 通路抑制剂处理后，细胞增殖率下降 60%，凋亡率上升 40%，证实该通路在其恶性增殖中的核心作用。此外，细胞中 PI3K/Akt 信号通路异常激活，磷酸化 Akt（p-Akt）水平较正常肝细胞高 5 倍，可促进血管内皮生长因子（VEGF）的分泌，VEGF 是诱导肝内血管生成的关键因子，该细胞分泌的 VEGF 量是正常肝细胞的 4 倍，抗 VEGF 抗体处理可使肝内微血管密度减少 55%。
转移机制方面，BNL.1ME A.7R.1 细胞的肝内转移涉及多重调控。除 CD146 介导的黏附外，细胞高表达趋化因子受体 CXCR4，可响应肝组织高浓度的 CXCL12，迁移能力是 CXCR4 阴性细胞的 2.3 倍，CXCR4 拮抗剂处理可使肝内转移灶数量减少 50%。基因芯片分析显示，转移灶细胞中与肝窦定植相关的基因 ITGB1（整合素 β1）表达上调，该分子可与肝窦基质中的层粘连蛋白结合，促进肿瘤细胞在肝内的存活与增殖，ITGB1 抗体处理可使转移灶体积缩小 60%。
在药物筛选应用中，该细胞系是评估肝细胞癌靶向药物的有效模型。基于其 β-catenin 突变特性，对 Wnt 通路抑制剂敏感，半数抑制浓度（IC50）约 0.6μM，药物处理后细胞 G1 期比例增加 45%，凋亡率上升 35%。体内实验显示，Wnt 通路抑制剂口服可使 BALB/c 小鼠肝内肿瘤体积缩小 70%，肝内转移率从 70% 降至 25%，疗效显著。其肝靶向特性使其成为肝靶向药物的理想模型，某新型肝靶向纳米载药系统搭载药物后，对该细胞的杀伤率达 80%，较游离药物提高 40%，且在肝内肿瘤组织的富集量增加 5 倍。
在肿瘤微环境研究中，BNL.1ME A.7R.1 细胞与肝星状细胞的相互作用为解析转移机制提供了线索。共培养实验显示，肝星状细胞分泌的转化生长因子 -β（TGF-β）可激活肿瘤细胞的 Smad 通路，使 MMP-2 表达上调 3 倍，侵袭能力增强 50%，TGF-β 中和抗体可阻断这种促进作用。在缺氧微环境（1% O₂）中，细胞 HIF-1α 表达上调，诱导葡萄糖转运蛋白 GLUT3 表达，使细胞在低氧环境下的存活率达 90%，HIF-1α 抑制剂处理可降低其缺氧适应能力。
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