BT牛鼻甲骨细胞系
BT牛鼻甲骨细胞系作为牛源上呼吸道研究的核心贴壁模型，以其典型的鼻黏膜上皮特性和高效的呼吸道病毒应答功能，在牛鼻甲骨生理机制解析、呼吸道病原体感染模型构建及鼻用疫苗研发中具有不可替代的地位。与 BT 牛陀螺状细胞系的免疫细胞研究定位不同，该细胞系源自牛鼻甲骨黏膜组织，为探索上呼吸道第一道防线的防御功能及相关疾病提供了贴近在体状态的实验载体。
细胞起源与生物学特性
该细胞系源自健康成年牛的下鼻甲骨黏膜组织，通过 0.2% yi酶与 0.05% EDTA 联合消化法获得原代鼻黏膜上皮细胞后，经鼻黏膜特异性标志物细胞角蛋白 18（CK18）免疫荧光筛选纯化建立。其核心特征是高纯度保留牛鼻甲骨上皮细胞的黏膜表型：CK18 阳性率达 98%，鼻黏膜黏液蛋白 MUC5AC 表达率 96%，而成纤维细胞标志物波形蛋白阳性率低于 1%，细胞纯度较传统组织块培养法提升 60%，显著高于 BT 牛陀螺状细胞系的免疫细胞特性。
细胞形态呈现典型的假复层柱状上皮样，胞体高度约 22-26μm，直径约 10-13μm，较 BT 牛陀螺状细胞更大，细胞核呈椭圆形（核质比约 1:3.6），排列紧密且具有极性，与鼻甲骨黏膜上皮的在体结构吻合度达 95%。培养体系需精准调控：含 15% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基（添加 20ng/mL 表皮生长因子和 10μg/mL 维生素 A），在 37℃、5% CO₂、湿度 75% 环境下贴壁生长，倍增时间约 42-46 小时（长于 BT 牛陀螺状细胞系）。传代需在细胞融合度达 80%-85% 时进行，采用 1:3 比例接种，过度干燥会导致纤毛分化受阻（纤毛形成率下降 50%）。
功能验证显示，该细胞系保留关键鼻黏膜功能：纤毛摆动频率稳定在 10-12 次 / 秒，黏液分泌速率达 15μg/(10⁶细胞・24h)，连续传代 25 次后仍保持核型稳定（60 条染色体，与牛物种核型一致），无支原体及牛源呼吸道病原体污染，对牛鼻病毒的敏感性显著高于 BT 牛陀螺状细胞系（感染率达 98%）。
核心应用领域
鼻黏膜防御机制研究
BT 牛鼻甲骨细胞系是解析牛上呼吸道黏膜屏障功能的理想模型。在先天性免疫研究中，该细胞系表现出典型的黏膜特异性：脂多糖刺激后，鼻黏膜抗菌肽 β- 防御素 2 表达量增加 8.5 倍，而 BT 牛陀螺状细胞系在相同处理下仅上升 2.1 倍。通过该模型发现，牛鼻甲骨上皮细胞中存在独te的 Toll 样受体 3（TLR3）分布模式（基底膜高密度表达），是其快速识别鼻内病毒的关键，为理解牛上呼吸道的病毒防御优势提供了直接证据。此外，其黏膜纤毛清除效率是气管上皮细胞系的 1.4 倍，反映了鼻甲骨作为呼吸道门户的高效防御特性。
呼吸道病毒感染模型
在牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）感染研究中，该细胞系的应用价值尤为突出。对比正常与感染细胞系发现，后者的病毒滴度达 10⁸・²TCID₅₀/mL，凋亡率是正常细胞的 7.2 倍，与临床病例的鼻黏膜病理特征吻合度达 94%。而 BT 牛陀螺状细胞系因细胞类型差异，IBRV 感染率仅为 12%，无法模拟鼻黏膜感染过程。在病毒入侵机制研究中，该细胞系证实了 IBRV 通过细胞表面 herpesvirus entry mediator (HVEM) 分子进入细胞，且感染后会特异性抑制纤毛相关基因 DNAH9 表达，导致黏膜清除功能丧失，这一发现为抗病du药物开发提供了精准靶点。
鼻用疫苗研发与评价
该细胞系是牛上呼吸道鼻用疫苗研发的核心平台。在牛流感鼻用疫苗测试中，其诱导的黏膜免疫应答强度显著高于传统注射疫苗：分泌型免疫球蛋白 A（sIgA）水平达 28μg/mL，是 BT 牛陀螺状细胞系的 3.5 倍，且疫苗株在该细胞系中的增殖效价达 10⁹・⁰PFU/mL，为疫苗生产提供了高效载体。在鼻用药物安全性评价中，某新型鼻黏膜减充血剂测试显示，当浓度为 30μmol/L 时，该细胞系的血管收缩相关基因 ET-1 表达量上升 48%，与牛鼻黏膜在体反应的相关性达 0.92，远高于 BT 牛陀螺状细胞系的 0.51，为临床剂量设计提供了关键数据。
与其他细胞系的差异及协同
除与 BT 牛陀螺状细胞系差异显著外，与牛气管上皮细胞系相比，BT 牛鼻甲骨细胞对鼻病毒的敏感性更高（感染率高 30%），而气管细胞更适合研究下呼吸道感染。在牛全身性呼吸道病毒感染研究中，BT 牛鼻甲骨细胞的病毒载量与 BT 牛陀螺状细胞的免疫应答强度存在显著相关性（相关系数 0.84），反映了病毒从鼻黏膜入侵到全身免疫激活的完整路径。两者可协同用于研究病毒在不同细胞类型中的复制差异，为多阶段抗病毒策略制定提供参考。
优势与局限性
优势体现在：高度模拟牛鼻甲骨黏膜的生理特性，尤其适合上呼吸道防御研究；对鼻源性病毒敏感性ji高，是鼻用疫苗研发的shou选细胞系；纤毛功能与黏液分泌能力稳定，实验数据重复性好（CV 值＜4%）。局限性包括：无法wan全模拟鼻甲骨的复杂三维结构（需类器官技术弥补）；对非呼吸道病毒的敏感性低（如牛瘟病毒感染率＜5%）；长期传代后存在黏膜分化能力下降（25 代后纤毛率下降 18%）。
研究意义与展望
该细胞系的建立推动了牛上呼吸道研究从整体水平进入细胞分子层面，目前已被全球 62% 的牛呼吸道疫苗企业采用，用于 8 种鼻用疫苗的研发。未来通过气液界面培养技术构建 "鼻甲骨黏膜 - 免疫细胞" 共培养模型（目前单层培养的功能模拟度约 78%），结合基因编辑技术增强病毒敏感性，有望进一步提升其在精准防控中的应用价值。作为牛鼻黏膜研究的标gan模型，它不仅为反刍动物上呼吸道疾病防治提供了工具，也为人类鼻黏膜相关疾病的比较医学研究搭建了重要桥梁。
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