产品系统PRODUCT CENTER

在发展中求生存,不断完善,以良好信誉和科学的管理促进企业迅速发展
产品系统

首页-产品系统-细胞-细胞系-BY-1347CHO-CaSR中国仓鼠卵巢细胞系

CHO-CaSR中国仓鼠卵巢细胞系
产品型号:BY-1347
简要描述:

CHO-CaSR中国仓鼠卵巢细胞系,上皮样,贴壁或悬浮生长,稳定表达钙敏感受体,响应钙浓度变化,适用于钙代谢研究、相关药物筛选及信号通路解析。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

CHO-CaSR中国仓鼠卵巢细胞系
CHO-CaSR中国仓鼠卵巢细胞系是经基因工程改造的功能型细胞模型,通过稳定整合人源钙敏感受体(CaSR)基因,实现 CaSR 的持续膜表达与钙浓度依赖性信号传导,因受体活性稳定、响应灵敏度高,成为钙代谢调控机制研究及钙敏感受体靶向药物开发的专属工具。其保留 CHO 细胞上皮样形态与双生长模式适应性,同时赋予钙信号动态监测能力,为解析 CaSR 在矿物质代谢、细胞生理中的作用提供了精准实验平台。
一、细胞来源与基本特性
  • 来源与构建:该细胞系以 CHO-K1 为亲本,通过慢病毒载体介导将人源 CaSR 全长 cDNA 导入细胞基因组,经嘌呤霉素抗性筛选及单克隆纯化获得稳定株。CaSR 基因由 CMV 启动子驱动表达,结合信号肽优化序列,确保受体正确定位于细胞膜(流式细胞术检测膜定位率>90%),名称中 “CaSR" 直接标识其核心功能蛋白。

  • 形态与增殖:体外培养呈上皮样形态,贴壁生长时呈多角形,排列紧密,悬浮培养可形成松散小聚集体(直径 20-40μm),细胞轮廓清晰,活力长期维持在 91% 以上。37℃、5% CO₂条件下,增殖周期约 30-36 小时,适应含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基,传代 60 次以上仍保持稳定生长速率,CaSR 表达量无明显衰减,冻存复苏后存活率超 88%。

  • 功能特征:该细胞系的核心优势在于 CaSR 的钙浓度响应特性:当 extracellular 钙离子浓度在 0.5-3.0mM 范围内变化时,CaSR 可通过 G 蛋白偶联途径激活下游 IP3/Ca²⁺信号通路,使胞内钙浓度波动幅度达基础值的 3-5 倍(荧光探针 Fura-2 检测);其 EC₅₀(半数有效浓度)为 1.2mM,与人体生理钙浓度范围高度匹配,且对 CaSR 激动剂(如锶离子)、拮抗剂(如 NPS-2143)的响应符合量效关系,功能活性接近内源性 CaSR。

二、核心应用领域
  1. 钙代谢调控机制研究

该细胞系是解析 CaSR 介导信号通路的理想模型。通过检测不同钙浓度下胞内 cAMP 水平(ELISA 法)与 ERK1/2 磷酸化程度(Western blot),可明确 CaSR 激活对下游效应分子的调控规律,发现钙浓度升高时 CaSR 可抑制腺苷酸环化酶活性(cAMP 下降 40%-60%),同时促进 MAPK 通路激活(ERK1/2 磷酸化增强 2-3 倍)。在甲状旁腺功能研究中,其可模拟钙浓度对甲状旁腺激素(PTH)分泌的调节,为原发性甲状旁腺功能亢进的发病机制提供实验依据。
  1. 钙敏感受体药物筛选

在药物研发中,该细胞系可用于高通量筛选 CaSR 激动剂 / 拮抗剂。通过建立荧光钙成像检测体系:将细胞加载钙敏感探针,加入候选药物后监测胞内钙信号变化,可快速评估药物活性。例如,在筛选治疗骨质疏松的 CaSR 激动剂时,其能精准区分不同化合物的效价强度(EC₅₀差异可精确至 10⁻⁹M 级别),筛选准确率达 92% 以上,且兼容 384 孔板自动化检测,显著提升研发效率。
  1. 离子稳态检测模型

因 CaSR 对镁离子、锶离子等二价阳离子也有响应,该细胞系可拓展用于多种离子稳态研究。通过对比不同离子对 CaSR 的激活效率(钙>镁>锶),可解析 CaSR 的配体识别特异性;在肾脏离子重吸收研究中,其可模拟肾小管上皮细胞对钙的感知过程,为肾结石形成的离子调控机制提供新视角。
三、培养方法
  • 贴壁培养操作

  1. 复苏:从液氮取出冻存管,37℃水浴 1-2 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(DMEM/F12+10% 胎牛血清 + 2μg/mL 嘌呤霉素)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T25 培养瓶,37℃、5% CO₂培养箱静置培养。

  1. 换液:接种 24 小时后首ci换液,去除未贴壁细胞,此后每 48 小时换液一次,维持培养基钙浓度在 1.8mM(生理浓度)。

  1. 传代:当细胞融合度达 80%-90% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加入 1mL 0.25% yi酶 - EDTA,37℃孵育 2-3 分钟,镜检细胞变圆后加入 4mL 培养基终止消化,1000rpm 离心 5 分钟,按 1:4 比例传代至新培养瓶。

  • 功能实验前处理

用于钙响应实验时,需提前 12 小时更换低钙培养基(钙浓度 0.5mM),避免基础钙浓度过高影响检测灵敏度;加载荧光探针(如 Fura-2 AM)时,用含 2μM 探针的 HBSS 缓冲液 37℃孵育 30 分钟,洗涤后即可用于实时钙成像检测。
  • 冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,用冻存液(80% wan全培养基 + 10% 胎牛血清 + 10% DMSO)重悬至 5×10⁶个 /mL,分装至冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜,次日转移至液氮保存,保存期可达 5 年以上。

四、优势与局限性
  • 优势:CaSR 表达稳定,钙响应灵敏度高(浓度变化 0.1mM 即可检测到信号);功能实验重复性好(批间变异系数<8%);可同时用于激动剂与拮抗剂筛选,应用范围广;贴壁牢固,适合长时程荧光成像实验。

  • 局限性:作为异源表达系统,缺乏内源性辅助蛋白(如 G 蛋白亚型),部分信号通路与原代细胞存在差异;高浓度钙(>5mM)会抑制细胞增殖,功能实验需严格控制钙浓度范围。

五、研究意义
CHO-CaSR 细胞系的建立为钙敏感受体研究提供了标准化工具,其高特异性与可操作性推动了对钙代谢调控网络的理解。在基础研究中,其助力阐明 CaSR 在甲状旁腺、肾脏等组织中的生理功能,为钙相关疾病的发病机制提供新解释;在应用领域,其加速了 CaSR 靶向药物(如拟钙剂、 calcilytics)的研发进程,尤其对继发性甲状旁腺功能亢进、骨质疏松等疾病的治疗具有重要转化价值,为代谢性疾病药物开发提供了高效筛选平台。

 以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

相关产品

扫一扫
添加微信

扫一扫
手机浏览

Copyright©2025  上海乾思生物科技有限公司  版权所有    备案号:沪ICP备2023041625号-7    sitemap.xml    技术支持:化工仪器网    管理登陆

TEL:021-34556080