Hep-3B [Hep3B]人肝癌细胞系
Hep-3B [Hep3B]人肝癌细胞系源于人体肝细胞癌组织,是研究肝癌发生发展机制、开发抗癌药物的重要模型。在显微镜下,Hep-3B 细胞呈现典型的上皮样癌细胞形态,多为多边形或不规则形,以贴壁方式生长于培养瓶底部,细胞间连接紧密,常堆叠形成多层细胞集落。细胞胞质丰富,经染色后呈嗜酸性,内部线粒体、内质网等细胞器异常发达,线粒体为癌细胞快速增殖提供充足能量,内质网则大量参与异常蛋白的合成与加工;细胞核大且深染,核质比例失调,核仁明显且数目增多,部分细胞还可见多核及异常核分裂象,这些形态学特征直观体现出其恶性肿瘤细胞的本质。
Hep-3B 细胞具有显著的生物学特性。在增殖能力上,其细胞周期调控机制紊乱,Cyclin D1、CDK4 等蛋白高表达,促使细胞周期蛋白依赖性激酶持续活化,推动细胞快速从 G1 期进入 S 期,在适宜培养条件下,细胞倍增时间约为 24 - 36 小时。同时,Hep-3B 细胞中 Wnt/β-catenin、PI3K/AKT 等信号通路异常激活,Wnt/β-catenin 通路激活后,β-catenin 蛋白在细胞质中大量积累并转入细胞核,启动一系列与细胞增殖、侵袭相关基因的转录;PI3K/AKT 通路则抑制细胞凋亡,增强细胞代谢活性,进一步促进癌细胞的存活与增殖。在侵袭转移方面,Hep-3B 细胞分泌基质金属蛋白酶 MMP-2 和 MMP-9 的能力较强,这些蛋白酶能够高效降解肝组织细胞外基质中的胶原蛋白、层粘连蛋白等成分,破坏基底膜完整性;细胞表面整合素家族蛋白表达上调,增强细胞与细胞外基质的黏附与脱离能力,为癌细胞突破上皮屏障、发生远处转移创造条件。此外,Hep-3B 细胞对部分hua疗药物存在天然耐药性,这种特性使其成为研究肝癌耐药机制的理想对象。
培养 Hep-3B 人肝癌细胞系需遵循严格的操作规范。常用含 10% 优质胎牛血清的 DMEM 培养基作为基础培养体系,胎牛血清中的生长因子、氨基酸等物质能充分满足细胞生长和代谢需求;添加 1% 的青mei素 - 链mei素双抗溶液,防止细菌污染。将细胞置于 37℃、5% 二氧化碳的恒温培养箱中,模拟人体生理环境,维持细胞内酸碱平衡与酶活性。当细胞汇合度达到 80% - 90% 时,使用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液进行消化传代,消化过程需在显微镜下实时观察,避免过度消化损伤细胞,传代比例一般控制在 1:3 - 1:5。冻存时,采用 90% 胎牛血清与 10% 二甲基亚砜混合冻存液,遵循程序降温原则,先于 - 80℃冰箱过夜,再转移至液氮中长期保存。在培养过程中,还需定期检测细胞的生长状态、基因型稳定性及耐药相关蛋白表达情况,确保实验结果的可靠性。
在科研应用领域,Hep-3B 细胞系成果丰硕。在肝癌发病机制研究中,科研人员借助该细胞系深入探究 TP53、CTNNB1 等基因突变与肝癌发生发展的关联,发现 TP53 基因缺失与 Wnt/β-catenin 通路激活协同作用,显著加速癌细胞的恶性转化进程。在药物研发方面,Hep-3B 细胞是筛选抗肝癌药物的重要模型,新型的靶向 VEGFR 的小分子抑制剂、免疫检查点抑制剂在该细胞系实验中,能有效抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡;针对其耐药特性开展的联合用药研究,也取得了显著进展,为克服肝癌耐药问题提供了新策略。此外,Hep-3B 细胞还用于评估肝癌的新型治疗方案,如纳米颗粒载药系统、基因治疗策略等,助力优化肝癌治疗手段,推动肝癌诊疗技术不断进步。
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