技术文章
TECHNICAL ARTICLES详细介绍
来源与形态:该细胞系源自中国仓鼠卵巢细胞(CHO),通过基因转染技术导入 CTLA4-Ig 融合基因(由细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原 4 的胞外区与免疫球蛋白 Fc 段组成),经筛选获得稳定表达株。体外培养时呈上皮样形态,贴壁生长,细胞呈多边形,排列紧密,边缘清晰。在 37℃、5% CO₂的培养环境中,增殖稳定,传代周期约 3 天,可适应贴壁培养或悬浮培养体系。
遗传特征:保留 CHO 细胞的核型特点(染色体数目约 20-22 条,非整倍体),基因组经人工修饰后,CTLA4-Ig 基因整合于染色体稳定区域,可长期稳定表达目标蛋白。其遗传背景清晰,无内源性病毒序列,且对嘌呤类似物等筛选标记敏感,便于单克隆细胞株的纯化与传代。
免疫调节机制研究
生物制药与药物开发
抗体药物筛选
优势:能稳定、高效表达具有生物活性的 CTLA4-Ig 蛋白,产物纯度高、均一性好;继承 CHO 细胞的培养优势,可适应无血清悬浮培养,便于工业化放大生产;且细胞遗传稳定性强,长期传代后仍保持目标蛋白的高表达量,实验重复性优异。
局限性:作为动物细胞系,其表达的 CTLA4-Ig 蛋白糖基化模式与人类细胞存在细微差异,可能影响部分临床应用中的免疫原性;此外,目标蛋白的表达量受培养条件影响较大,需通过优化培养基成分(如添加特定氨基酸)提升产量。
培养条件:常规使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基,若用于蛋白生产,可改用化学成分明确的无血清培养基,减少外源蛋白干扰。培养过程中需控制细胞密度(贴壁培养融合度不超过 80%),避免过度密集导致表达量下降。
污染防控:严格无菌操作,定期检测支原体污染(推荐 PCR 法);冻存时采用含 10% DMSO 的冻存液,梯度降温后保存于液氮中,复苏时 37℃快速解冻,离心去除 DMSO 以保护细胞活性。
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