RPMI-8226人多发性骨髓瘤细胞系
RPMI-8226人多发性骨髓瘤细胞系是研究多发性骨髓瘤(MM)的经典模型,因具备典型的浆细胞表型、稳定的单克隆蛋白分泌能力及药物抗性特征,在 MM 发病机制、耐药机制及靶向药物研发中应用广泛,为解析 MM 的 “克隆增殖 - 骨髓微环境互作" 双重特征提供了可靠工具。
来源与背景:该细胞系于 1966 年从一名 53 岁女性 MM 患者的外周血中分离建立,虽源自外周血,但保留了丰富的浆细胞特征。与其他 MM 细胞系(如 U266)相比,其更贴近临床 MM 的浆细胞分化表型,尤其适合研究 MM 细胞与骨髓基质细胞的相互作用,为探索 “浆细胞恶性增殖 - 骨髓微环境重塑" 提供了理想样本,填bu了 MM 与骨髓微环境关联研究模型的空白。其明确的外周血来源和长期传代稳定性,使其成为 MM 血液播散与骨髓微环境研究的重要桥梁。
细胞特性:形态上呈圆形或椭圆形,悬浮生长,部分细胞因胞质黏附呈现轻微聚集,细胞质丰富,可见空泡(免疫球蛋白储存特征),细胞核呈圆形或卵圆形,核仁明显,核质比约 1:1.5,具有浆细胞的典型形态特征。核心特性为单克隆蛋白分泌功能,持续分泌 IgG 型单克隆免疫球蛋白,培养基中可检测到较高浓度的单克隆蛋白,这一特性使其成为研究 MM 蛋白代谢及相关并发症(如高黏滞综合征)的理想模型;浆细胞标志物表达,高表达 CD138( Syndecan-1)、CD38,弱表达 CD45,不表达 B 细胞标志物 CD20,符合浆细胞的分子表型;中等增殖与耐药能力,体外培养时细胞倍增时间约 48-60 小时,克隆形成率约 40%,对常规hua疗药物(如 melphalan)存在一定抗性,耐药指数是敏感细胞系的 2-3 倍,其耐药特性与临床 MM 患者的治疗抵抗现象高度吻合。传代时无需消化处理,直接吹打悬浮细胞即可,传代比例 1:2-1:4,连续传代 50 次后仍保持单克隆蛋白分泌能力,但分泌量可能下降 10%-15%。
培养条件:适宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基,添加 2mM 谷an酰胺、10mM HEPES 和 1% 抗菌混合液以维持细胞活性。培养环境需控制在 37℃、5% CO₂饱和湿度,每 2-3 天更换一次培养基,细胞密度维持在 1×10⁵-5×10⁶个 /ml 之间,密度过高会导致细胞聚团并影响活性。与贴壁细胞系不同,其对振荡较敏感,培养过程中应避免剧烈晃动,传代时通过离心(1000rpm,5 分钟)收集细胞,用新鲜培养基重悬后接种,冻存液推荐含 10% DMSO 的胎牛血清,复苏后存活率可达 80% 以上,复苏后 24 小时即可恢复正常增殖及蛋白分泌功能。
检测鉴定:经微生物筛查,无支原体、细菌、真菌及常见病毒污染,符合实验细胞质量标准。流式细胞术检测显示,CD138 阳性率超过 90%,CD38 阳性率超过 85%,CD45 阳性率约 10%-20%,符合浆细胞的免疫表型特征。蛋白分泌检测证实其持续分泌 IgG 型单克隆蛋白,培养基中 IgG 浓度可达 5-10μg/ml/10⁶细胞 / 24 小时。染色体核型分析呈现亚二倍体核型,存在 14 号染色体易位 [t (14;16)] 等异常,与约 20% 的 MM 患者遗传学改变吻合,该易位导致 MAF 原癌基因过表达,与细胞增殖及耐药性相关。功能验证实验中,与骨髓基质细胞共培养后,其增殖速率提升 30%-50%,证实其对骨髓微环境的依赖性,模拟临床 MM 细胞在骨髓中的生长特征。
应用领域:在发病机制研究中,该细胞系常用于解析 MM 的克隆增殖机制,研究发现其高表达 IL-6 受体,IL-6 可通过激活 JAK/STAT3 通路促进其增殖,阻断该通路可显著抑制细胞生长,为理解 MM 的 “细胞因子依赖型增殖" 提供了关键线索。在耐药机制研究方面,适用于探索 MM 的药物抵抗原因,通过建立耐药亚株发现,ABC 转运蛋白(如 ABCB1)过表达及凋亡通路异常(如 Bcl-2 高表达)是其耐药的重要机制,为逆转耐药提供潜在靶点。在药物筛选方面,是评估 MM 治疗药物的常用模型,通过检测药物对其增殖、凋亡及蛋白分泌的影响,筛选能有效抑制 MM 细胞的候选药物,如蛋白酶体抑制剂可显著诱导其凋亡,且与免疫调节剂联用具有协同效应。此外,该细胞系可用于研究 MM 与骨微环境的相互作用,其分泌的破骨细胞活化因子(如 RANKL)可诱导破骨细胞分化,导致骨吸收增强,模拟临床 MM 的骨病特征,为研究 MM 骨病机制提供实验基础。
该细胞系的优势在于能稳定维持浆细胞表型及单克隆蛋白分泌功能,为研究 “MM 细胞 - 骨髓微环境互作" 提供了理想模型。通过与其他 MM 细胞系(如 U266)的对比实验,可清晰区分不同 MM 亚型在增殖、耐药及微环境依赖性上的差异,为 MM 的精准治疗提供实验依据。
总之,RPMI-8226 人多发性骨髓瘤细胞系凭借其典型的浆细胞特征、稳定的生物学特性及与临床 MM 的高度吻合性,成为 MM 基础研究与临床转化的重要工具,为解析 MM 的发病机制、开发新型治疗药物及优化治疗方案提供了坚实的实验基础。
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